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《血清4型禽腺病毒病诊断技术》

编制说明

一、工作简况，包括任务来源、协作单位、主要工作过程、主要起草人及其所做的工

作

1、任务来源

血清4型禽腺病毒（Fowladenovirusserotype4）呈世界性分布，侵染对象为鸡、鸭

等主要禽种及其他家养和野生动物，各年龄段家禽均易感。自2015年以来，国内大部分

家禽密集养殖地区均爆发由高致病性血清4型禽腺病毒（FAdV-4）感染引起的肝炎-心包

积液综合症，造成严重的经济损失。目前FAdV-4仍在中国广泛流行，防控形势依然严峻。

国际上诊断FAdV抗体的标准方法为琼脂扩散试验（AGP），其灵敏度较低，已经远不能

适应当前和今后我国防控需要。虽然国内外已有一些FAdV-4快速检测方法的研究报道，

但是国内目前尚无FAdV-4的标准化病原分离及其特异性抗原、抗体诊断技术国家标准、

行业标准、地方标准或团体标准。因此，起草专家组结合多年的研究成果和应用经验，

参考相关文献起草了《血清4型禽腺病毒病诊断技术》标准。该技术标准具有科学性、实

用性和可操作性。标准发布后，将对我国FAdV-4的诊断、监测、检验检疫和流行病学调

查等工作提供重要技术支撑。

2、协作单位

本项目的协作单位：扬州大学、中国农业科学院上海兽医研究所。

3、主要工作过程

（1）2017年7月-2017年12月，制备了FAdV-4的Fiber-2蛋白原核表达产物，作为ELISA

检测技术中的特异性包被物质；2017年9月-2018年9月，研究、制备并获得针对于FAdV-4

的Fiber-2蛋白的特异性单克隆抗体，作为间接免疫荧光技术中识别检测目标的特异性抗

体。

（2）2015年9月-2018年9月，第一，广泛收集中国各地区流行的FAdV-4毒株、其他

血清型的禽腺病毒毒株等实验材料，确定FAdV-4攻毒模型和体外培养方法；第二，广泛

收集禽类组织、拭子、粪便、血清等临床样本，同时采用标准研制的方法与相关国标方

法，完成标准方法的特异性试验和灵敏度试验。

（3）2018年9月-2020年2月，分别建立PCR诊断技术、病毒分离技术、间接免疫荧光

（IFA）鉴定技术、ELISA血清抗体检测技术，优化了各项检测参数，完成了特异性试验

和灵敏度比对试验。同时与背景清楚的实验材料完成比对验证检测。最终确定了标准草

稿的各个检测步骤操作的具体内容。

（4）2020年2月-2020年11月，完成了标准制定相关资料的收集、汇总。

3、主要起草人及其所做的工作

2020年9月，项目主持人组建标准起草小组，制定了项目工作计划，明确了起草小

组中每个人的职责及工作内容。主要起草人及其分工如下：

叶建强：项目主持人，负责项目设计与实施。

陈鸿军：项目共同主持人。

秦爱建：指导项目设计与实施。

谢松桦，谢泉：负责PCR诊断技术与病毒分离技术的起草。

王伟康，吕璐，邵红霞：负责ELISA血清抗体检测技术的起草。

万志敏，李拓凡：负责间接免疫荧光（IFA）鉴定技术的起草。

按照任务分工，起草小组制定了《血清4型禽腺病毒诊断技术》征求意见稿。

二、确定江苏省农学会团体标准主要技术内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、

实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据）

（一）标准的编写原则

本标准的编制依据《中华人民共和国标准化法》，按照中华人民共和国国家标准

GB/T1.1—2020给出的规定进行。

（二）FAdV-4抗体间接ELISA试剂盒的验证试验研究

本试验是将纯化的Fiber-2蛋白作为包被抗原，建立了检测FAdV-4抗体的间接ELISA

方法，并对ELISA各参数进行了优化；测试所建立ELISA方法的特异性、灵敏度、重复

稳定性，同时统计试剂盒与琼脂扩散试验、间接免疫荧光方法、荷兰Biochek公司生产销

售的商品化FAdV抗体间接ELISA试剂盒检测的符合率。

特异性检测发现，该ELISA仅与抗FAdV-4及FAdV-10病毒血清发生特异性反应，

而与所检测的其他各型禽腺病毒（FAdV-1、-2、-3、-5、-6、-7、-8a、-8b、-9、-11）阳

性血清、其他禽源病毒阳性血清（NDV、CAV、ALV、IBDV、IBV）以及SPF鸡血清

均无反应；灵敏度检测发现，ELISA检测血清效价在1：6400以上，最高可达1；51200；

重复