血凝和血凝抑制实验.pptVIP

血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法了解新城疫有关背景知识一、实验目的二、实验内容1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。病毒颗粒红细胞三、实验原理2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。Iamlate！抗体抗原血凝板（96孔90oV型）新城疫阳性血清被检血清（1份）1％红细胞悬液稀释液移液器（50ul,2人/把）枪头四、实验材料STEP5STEP4STEP3STEP2STEP1在血凝板上第一排和第二排的1－12孔内各加入25ul生理盐水在第1孔内加入25ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃25ul（也就是可以一次做2个抗原效价测定）每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟结果判定血凝试验（HA)五、实验方法与结果判定血凝效价测定＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；1＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；2＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；3＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；4－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；5结果判定标准血凝价的判定以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）？？？。25ul1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。血凝抑制试验1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32）2、在血凝板上1－12孔内各加入25ul生理盐水；3、在第1孔内加入被检血清25ul，然后倍比稀释至第10孔，最后弃25ul；4、第1－11孔内加入4单位抗原25ul（第11孔为抗原对照第12孔为红细胞对照）；5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟6、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul；7、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟8、结果判定血凝抑制效价测定＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；01＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块，即50％凝集；03－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。05＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；02＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；04结果判定标准