T BDAS 001—2023 牛奶中褪黑素含量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdfVIP

ICS67.100.10

X04

团体标准

T/BDAS001-2023

代替T/BDAS001-2021

牛奶中褪黑素含量的测定

液相色谱-串联质谱法

Determinationofmelatonincontentinmilk—

Liquidchromatography-tandemmassspectrometry

2023-3-14发布2023-3-20实施

北京市奶业协会发布

牛奶中褪黑素含量的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件描述了牛奶中褪黑素含量测定的液相色谱-串联质谱法。

本文件适用于生牛乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素的测定。

本文件中褪黑素的检出限为0.01μg/L，定量限为0.05μg/L。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

用甲醇提取牛奶试样中褪黑素，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法

定量。

5试剂或材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯。

5.1水：GB/T6682，一级。

5.2甲醇（CHOH）：色谱纯。

3

5.3甲酸（CHO）：色谱纯。

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5.4甲酸水溶液（0.1%）：取1mL甲酸，用水稀释至1000mL。

5.5甲醇水溶液（2%）：取2mL甲醇，用水稀释至100mL。

5.6褪黑素标准储备液（1mg/mL）：准确称取褪黑素标准品（CAS号：73-31-4，纯度≥98%）

100mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶，配制成1mg/mL的标

准储备液，于-18℃以下避光保存，有效期为1个月。

5.7褪黑素标准中间液Ⅰ（10μg/mL）：精密移取0.1mL褪黑素标准储备液（5.6）于10mL

棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，临用现配。

5.8褪黑素标准中间液Ⅱ（0.1μg/mL）：精密移取0.1mL褪黑素标准中间液Ⅰ（5.7）于10mL

棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，临用现配。

5.9褪黑素标准工作液（10μg/L）：精密移取1mL褪黑素标准中间液Ⅱ（5.8）于10mL棕

色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，临用现配。

5.10氘代褪黑素标准品（褪黑素-D4，CAS号：66521-38-8）：浓度为500μg/L。

5.11氘代褪黑素标准工作液（5μg/L）：精密移取氘代褪黑素标准品（5.10）0.1mL于10mL

棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，临用现配。

5.12褪黑素系列标准溶液：精密移取褪黑素标准工作液（5.9）和氘代褪黑素标准工作液（5.11）

适量，用流动相稀释，配制成褪黑素浓度为0.01μg/L、0.05μg/L、0.10μg/L、0.20μg/L、1.0

μg/L和2.0μg/L的系列标准溶液（氘代褪黑素浓度均为0.05μg/L）。

5.13HLB（亲水/油平衡型）固相萃取柱：10mg，1mL固相萃取柱，或功能相当者。

5.14一次性微孔滤膜：0.22μm，有机相。

6仪器设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量0.1mg。

6.3超声波清洗机。

6.4低温高速离心机：4℃，离心力不低于10000g。

6.5旋涡混合仪。

6.6氮吹仪。

7样品

将待测样品充分混匀，取出样品约100mL，装入洁净容器中，密封，并注明标记。样

品如需保存，于-18℃以下冷冻保存。

8试验步骤