2025届高考生物一轮复习：高中生物PCR技术中“引物”相关问题归类分析.docx

高中生物PCR技术中“引物”相关问题归类分析

近几年高考试题和模拟题中出现了大量与引物有关的试题，而现有高中生物教材只提及PCR技术需要引物。为什么需要引物？引物是什么？引物的作用是什么？引物的碱基序列如何设计？PCR循环时需要几种多少个引物？如何选择引物和判断引物的互补链？引物与PCR反应时复性温度的高低和时间长短有什么关系？这些相关问题在教材中并没有提及，因此需要教师对上述相关问题进行归类分析。

笔者在基因工程专题的复习过程中建构了以引物为核心的知识网络图（图1），培养学生学科内知识的综合能力，拓展学生视野，提高学生的科学素养。然后各个击破相关知识点，夯实学生的基础，加深对引物的理解。利用精选的典型试题，强化巩固知识，提升学生的解题能力。同时从侧面为教师的教学提供参考，提升对教学的广度和深度的把控

引物

引物

引物的选择和引物互补链的判断

PCR循环时引物的计算

引物的设计原则

引物的处理

引物与PCR反应时复性温度的高低和时间长短之间的关系

DNA的复制和PCR反应需要引物

引物的设计

引物的作用

图1“引物”知识网络图

1引物存在的必要性

1.1DNA的复制需要引物DNA聚合酶只能催化脱氧核糖核苷酸加到已有核酸链的游离3′-羟基上，而不能使脱氧核糖核苷酸自身发生聚合，也就是说，它需要引物链的存在[1]。引物是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链的一段碱基互补配对。细胞内DNA复制以RNA作引物，从新合成的冈崎片段上发现含有一短暂存在的小的RNA片段附着在5′段这一事实可以说明DNA复制时需要RNA引物，这些引物长5-10bp，现在已经知道RNA引物的合成是由一种特殊的RNA合成酶——引物酶所催化的[2]。PCR反应以DNA作引物。

例1：请回答基因工程方面的有关问题：PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式（图2）不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为

。

图2DNA聚合酶催化的反应的表达式

1.2引物的作用DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链。不同的引物可以寻找不同的目的基因并进行扩增。

例2：请回答基因工程方面的有关问题：

1）若用PCR技术扩增psy基因和crtI基因，需要分别在不同的PCR扩增仪中加入种引物，其作用是

。

2）在利用PCR技术扩增R（抗旱）或r基因过程中，利用_____可寻找抗旱基因的位置并进行扩增。

例3：为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中（图3），致使该基因失活，失活后的基因记为d。为验证F2植株基因型（DD、Dd和dd），研究者根据D基因、T-DNA的序列，设计了3种引物，如图4所示：

图3将T-DNA插入到D基因图43种引物的碱基序列

随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR）。

如果引物“Ⅰ+Ⅲ”组及“Ⅱ+Ⅲ”组进行PCR均可完成扩增，则相应植株的基因型为。

如果，则相应植株的基因型为。

如果，则相应植株的基因型为。

2引物的设计

2.1引物的设计原则引物是根据目的基因特有的一段已知的核苷酸序列设计合成的，能与目的基因的模板链通过碱基互补配对特异性地结合。

设计引物的主要原则为[1]：①引物长度应大于16个核苷酸，可防止随机结合。②引物与靶序列间的Tm不应过低。③引物不应有发夹结构，即不能有4bp以上的回文序列。④两引物间不应有4bp以上的互补序列或同源序列，在3′端不应有任何互补的碱基。⑤引物中碱基的分布尽可能均匀，G+C含量接近50%。

例4：请回答基因工程方面的有关问题：

1）通过PCR技术可在DNA分子中专一性扩增出某目的基因，其原因是