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PCR实验室基因扩增检验人员培训试题及答案

填空题

1.PCR是指聚合酶链式反应，其基本原理是模拟体内DNA半保留复制过程。

2.PCR反应体系主要包括模板DNA、引物、dNTP、DNA聚合酶、缓冲液等成分。

3.引物设计的基本原则包括特异性、长度合适、避免引物二聚体、GC含量适宜等。

4.荧光定量PCR常用的荧光化学方法有SYBRGreenⅠ和水解探针两种。

5.在PCR实验室分区中，通常分为试剂准备区、标本制备区、扩增区和扩增产物分析区。

6.为防止PCR实验室的污染，实验过程中应使用一次性手套、移液器吸头带滤芯等。

7.PCR反应的三个基本步骤是变性、退火、延伸。

8.常用的DNA聚合酶有TaqDNA聚合酶、PfuDNA聚合酶等，其中PfuDNA聚合酶具有较高的保真性。

9.荧光定量PCR中，Ct值是指荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

10.反转录PCR（RTPCR）是将RNA逆转录为cDNA后再进行PCR扩增。

11.基因扩增检验实验室的空气流向应从清洁区流向污染区。

12.进行PCR实验时，模板DNA的质量和浓度会影响PCR反应的结果。

13.引物的退火温度一般根据其Tm值来确定，通常比Tm值低5℃左右。

14.阳性对照的作用是验证PCR反应体系的有效性，阴性对照的作用是检测是否存在污染。

15.PCR产物的检测方法有琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、测序等。

16.在PCR实验室中，紫外线灯主要用于空气和物体表面的消毒。

17.基因扩增检验人员应经过专业培训并取得相应的资格证书后才能上岗。

18.实时荧光定量PCR可以对样本中的核酸含量进行定量分析。

19.标本采集后应尽快进行处理，如果不能及时处理，应将标本保存在20℃或80℃冰箱中。

20.PCR实验室的废弃物应按照医疗废物进行处理。

单选题

1.PCR反应中，变性温度一般为（）

A.55℃

B.72℃

C.94℃

D.100℃

答案：C

解析：PCR变性步骤是使双链DNA解链为单链，一般在94℃左右。

2.以下哪种物质不是PCR反应体系的成分（）

A.引物

B.抗体

C.dNTP

D.DNA聚合酶

答案：B

解析：PCR反应体系包含模板DNA、引物、dNTP、DNA聚合酶和缓冲液等，抗体不是其成分。

3.荧光定量PCR中，SYBRGreenⅠ的作用是（）

A.标记引物

B.标记模板

C.与双链DNA结合发光

D.与单链DNA结合发光

答案：C

解析：SYBRGreenⅠ能与双链DNA结合并发出荧光，通过检测荧光强度来监测PCR产物的扩增情况。

4.PCR实验室中，试剂准备区应配备的仪器不包括（）

A.天平

B.离心机

C.生物安全柜

D.测序仪

答案：D

解析：试剂准备区主要进行试剂的配制等操作，不需要测序仪，测序仪一般在扩增产物分析区使用。

5.引物设计时，GC含量一般应控制在（）

A.10%20%

B.20%30%

C.40%60%

D.70%80%

答案：C

解析：引物GC含量在40%60%为宜，这样能保证引物的稳定性和特异性。

6.下列关于Ct值的描述，正确的是（）

A.Ct值越大，样本中核酸含量越高

B.Ct值越小，样本中核酸含量越高

C.Ct值与样本中核酸含量无关

D.Ct值只与PCR反应的循环数有关

答案：B

解析：Ct值是荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数，Ct值越小，说明在较早的循环数就达到了阈值，即样本中核酸含量越高。

7.反转录PCR中，逆转录酶的作用是（）

A.将DNA转录为RNA

B.将RNA逆转录为DNA

C.扩增DNA

D.扩增RNA

答案：B

解析：逆转录酶能以RNA为模板合成cDNA。

8.PCR实验中，为防止交叉污染，以下操作错误的是（）

A.不同区域使用不同的移液器

B.实验过程中可以不戴手套

C.吸头使用后应丢弃

D.实验结束后对实验室进行清洁和消毒

答案：B

解析：实验过程中必须戴手套，以防止污染和保护实验人员。

9.常用的DNA聚合酶Taq酶的最适反应温度是（）

A.37℃

B.55℃

C.72℃

D.94℃

答案：C

解析：Taq酶的最适反应温度是72℃，在此温度下能高效地进行DNA链的延伸。

10.荧光定量PCR的标准曲线是通过（）绘制的。

A.不同浓度的标准品的Ct值与对数浓度

B.不同浓度的标准品的荧光强度与浓度

C.不同循环数的荧光强度与浓度

D.不同循环数的Ct值与对数浓度

答