细胞组分的分离与鉴定.ppt

关于细胞组分的分离与鉴定第1页，共8页，星期日，2025年，2月5日一、实验目的了解用细胞匀浆和差速离心的方法分级分离细胞组分的原理及过程。熟悉离心机、匀浆器的使用方法。第2页，共8页，星期日，2025年，2月5日二、实验内容㈠实验原理细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同介质和不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。此法是通过组织细胞匀浆、分级分离（密度梯度离心或差速离心）和分析三个步骤完成的。第3页，共8页，星期日，2025年，2月5日在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、最后为核蛋白体。速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀1.差速离心（differentialcentrifugation）第4页，共8页，星期日，2025年，2月5日用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。2.密度梯度离心(densitygradientcentrifugation)第5页，共8页，星期日，2025年，2月5日㈡实验方法1.处死家兔：耳缘静脉空气栓塞法2.制备肝细胞匀浆:家兔处死后，立即剖腹取肝，迅速浸入预冷的生理盐水中洗去血污，用滤纸吸干。按每克肝重加9ml冷的0.25mol/L蔗糖溶液匀浆化。（20g×9ml/g=180ml）用八层纱布（先用少量蔗糖液湿润），过滤匀浆液于烧杯中。制备一张滤液涂片，做好标记，自然干燥。第6页，共8页，星期日，2025年，2月5日