3.2+基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第三章基因工程第2节基因工程的基本操作程序

从社会中来：普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞（有抗虫基因）抗虫棉

（有抗虫特性）导入与载体拼接抗虫基因（Bt基因）重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定苏云金杆菌提取表达Bt基因培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤呢？

根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要是指_________________。第一步：目的基因的筛选与获取1.目的基因①概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变________________或获得________________等的基因。受体细胞性状预期表达产物②实例：编码蛋白质的基因a、与生物抗逆性相关的基因（Bt抗虫基因）b、与优良品质相关的基因c、与生产药物相关的基因（胰岛素、干扰素基因）d、与毒物降解相关的基因e、与工业用酶相关的基因等

第一步：目的基因的筛选与获取2.筛选合适的目的基因①方法：a、较为有效的：从相关的_________和_______的基因中进行筛选。②实例：已知结构功能清晰Bt抗虫蛋白基因（Bt基因）的筛选过程用苏云金杆菌（Bt）制成的生物杀虫剂，广泛用于防治棉花虫害对Bt基因的表达产物——Bt抗虫蛋白有较为深入的了解：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因b、利用测序技术、__________（如GenBank）、____________（如BLAST）等，找到合适的目的基因。序列数据库序列比对工具

当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。Bt抗虫蛋白的抗虫原理：1、抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。第一步：目的基因的筛选与获取思考·讨论：相关信息

第一步：目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因①PCR的概念：PCR是_____________的缩写，它是一项根据______________的原理，在体外提供____________的各种组分与反应条件，对______________________进行大量复制的技术。聚合酶链式反应DNA半保留复制参与DNA复制酸序列目的基因的核苷②原理：③操作环境：④目的：⑤优点：DNA半保留复制。体外复制（PCR扩增仪/PCR仪）。对目的基因的核苷酸序列进行大量复制。可以在短时间内大量扩增目的基因。

DNA复制的过程

第一步：目的基因的筛选与获取

第一步：目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因体内DNA复制参与的组分在DNA复制中的作用PCR中参与的组分打开DNA双链提供DNA复制的模板合成子链的原料催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（通常为小的单链RNA）无需解旋酶，用高温代替目的基因的两条链4种脱氧核苷酸耐高温的DNA聚合酶引物（通常为小的单链DNA）反应还需要其它条件，如缓冲液、Mg2+等

目的基因的筛选与获取——引物一引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物通常为20~30个核苷酸。在细胞中为一段单链RNA，在PCR中为一段人工合成的单链DNA。什么是引物子链延伸子链延伸引物是决定PCR特异性的关键。-5′3′-引物15′--3′5′--3′引物23′--5′

目的基因的筛选与获取——利用PCR获取和扩增目的基因一3′5′子链的延伸方向是5′→3′DNA聚合酶3′5′模板链子链DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有链的3′端子链合成需要引物:引物为DNA聚合酶提供了游离的3′端，使DNA聚合酶从3′端延伸子链。(DNA聚合酶不具有从头合成子链的功能)

一、目的基因的筛选和获取拓展：引物3’5’DNA母链13’5’DNA母链23’5’引物13’5’引物23’5’DNA母链13’5’DNA母链2子链延伸方向5’3’PCR扩增的前提是：根据一段已知目的基因两端的核苷酸序列合成引物（不需要知道整个目的基因的碱基序列）由于DNA的两条链是反向平行的，用2种引物才能保证DNA的两条链同时被扩增，PCR扩增时至少需要2种引物引物的作用：定位目的基因的位置，与模板连结合，并为子链的