象耳豆根结线虫ace1和vab19基因功能研究.pdf

摘要

Meloidogyneenterolobii

象耳豆根结线虫（）在全球范围内已经成为危害农作物的

一种植物病原线虫，该线虫致病力强，寄主范围广，种群扩散迅速，给农作物造成

毁灭性危害，其2龄幼虫侵染寄主植物后导致植物的侧根或者须根上形成根结，随

着时间的推移根结慢慢增大并且容易腐烂。同时造成地上植株发育不良，植株矮小、

黄化，发病严重时，植株全株枯死。随着现代农业的发展，设施大棚和温室在生产

上的应用不断增多，导致土壤温度上升，象耳豆根结线虫向内地蔓延速度不断加快，

已受到国内外研究者的广泛关注。本文对采集的带病植株中的根结线虫进行了鉴定，

Meloidogyneincognita

根据南方根结线虫（）基因组的分析结果，筛选出两个可能影

响线虫生长发育及其致病性的基因：乙酰胆碱酯酶基因Me-ace-1和骨架蛋白基因

Me-vab-192

。从象耳豆根结线虫龄幼虫转录组数据库中搜索到了基因序列，并分别

对其进行了生物信息学分析以及RNAi效应分析。

1.使用解剖针从带病植株根部直接刨出根结线虫，并且将卵块泡在水中，在28℃

2

培养箱中孵化，孵化的龄幼虫接种进番茄植株进行扩大繁殖。运用分子生物学技

DNA18S28S

术对其进行鉴定，提取基因组后，使用根结线虫和通用引物进行基因

扩增，产物经纯化、连接、转化、测序后，比对为象耳豆根结线虫。设计象耳豆根

结线虫特异引物进行扩增，进一步确认为象耳豆根结线虫。收集不同龄期的根结线

虫进行形态学观察，并且制作雌虫会阴花纹切片进行观察，观察结果与象耳豆根结

线虫的形态特征相吻合，最终将其鉴定为象耳豆根结线虫。

2.2ace-1vab-19

从象耳豆根结线虫龄幼虫转录组数据库中搜索出了和基因序

列。对这两个基因的氨基酸序列进行生物信息学分析，分析结果显示，Me-ace-1基

因ORF为858bp，编码285个氨基酸，通过网站预测出它的分子量为32.06KD，等

7.60155-2581103Abhydrolase_3

电点为，并且在位氨基酸包含个个氨基酸左右的

结构域。Me-vab-19基因ORF为1158bp，编码385个氨基酸，分子量为42.69KD，

等电点为4.90，包含3个30个氨基酸左右的ANK结构域，分别位于200-230位、

272-301位以及305-333位。聚类分析发现，象耳豆根结线虫的这两个基因均与植物

qRT-PCRMe-ace-12

寄生线虫的亲缘关系最近。结果表明，在龄幼虫时期表达量最

高，在其他龄期均显示下降趋势；Me-vab-19在成年雌虫时期表达量最高，其次是2

I

龄幼虫时期，但没有显著差异。推测这两个基因可能在象耳豆根结线虫2龄幼虫侵

染寄主植物时发挥作用。

3.Me-ace-1Me-vab-19dsRNA2

通过体外浸泡和的方法对象耳豆根结线虫龄幼

虫进行RNAi。与对照组相比，经过Me-ace-1dsRNA和Me-vab-19dsRNA浸泡后的

2