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实验一动物细胞原代培养
实验目的01
掌握动物细胞培养的无
02菌操作技术。
掌握动物细胞原代培养
的基本方法。04
组织块贴壁培养法是将切成小块的
组织贴附在适宜的支持物上，细胞
从组织块边缘游离、生长，形成单
实验原理层细胞即为原代培养细胞。
0103
0204
原代培养(primaryculture)是指取分散细胞培养法是通过酶消化或机
自体内的新鲜组织、细胞，在体外械分离，使组织分散成单个细胞，
条件下生长至传代之前细胞培养阶
然后开始首次培养的方法。
段，是细胞培养的最初和必经阶段。
原代培养方法主要有组织块贴壁培
养法和分散细胞培养法。
•三、实验材料
•1．动物材料
出生2周内的大鼠。
•2．实验试剂
•（1）D-Hank’s液
•（2）75%乙醇
•（3）0.05%Ⅳ型胶原酶液
•（4）DMEM培养基
•（5）小牛血清
•（6）双抗溶液
•（7）0.4%台盼蓝染液
实验器材
超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、水浴锅、离心
机、眼科剪、眼科镊、移液器及枪头、培养皿、烧杯、细胞
培养瓶、吸管、离心管、血球计数板、载玻片、盖玻片、
200目不锈钢筛网、酒精灯、75％酒精棉球、记号笔等。
四、实验方法与步骤
取1只大鼠，颈椎脱臼法处死，浸入75%乙醇消毒。
将小鼠置于超净台中的大培养皿中，背部朝上，用75%酒精棉球擦拭其整个
背部皮肤。
用眼科镊提起小鼠腰部皮肤，用眼科剪横向剪开皮肤，稍用力将剪开的皮肤拉
向两端，暴露腰部。更换解剖器械，剪开腰部的肌肉、被膜，取出肾脏，置于
培养皿中。
更换解剖器械，去除肾被膜，去除肾盂，用含有双抗的D-Hanks液清洗3次，
剪取肾皮质部分，移入小烧杯中，加入少量D-Hanks液，剪成1mm3左右的
组织块。用D-Hanks液清洗3次，吸去上清液，尽量去除血细胞。
向组织块中加入0.05%Ⅳ型胶原酶用血球
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