蛹虫草中喷司他丁的测定 液相色谱法.doc

T/ZSJXXXXX—XXXX

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ICS65.020.01CCSB10团体标准

ICS65.020.01

CCSB10

T/LAIA

T/LAIA003—2023

蛹虫草中喷司他丁的测定

液相色谱法

DeterminationofergosterolinCordycepsmilitarisanditsrelatedproducts

liquidchromatography

202

2024年-03-12发布2024年-03-12实施

辽宁省分析测试协会

辽宁省分析测试协会发布

蛹虫草中喷司他丁的测定液相色谱法

范围

本标准规定了测定蛹虫草中喷司他丁的液相色谱法。

本标准适用于蛹虫草子实体、菌丝体（干品）中喷司他丁的测定。

本方法检出限为1mg/kg。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T12728食用菌术语

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

喷司他丁

Pentostatin

CAS号53910-25-1，分子式C11H16N4O4，分子量为258.27，结构式见图1。喷司他丁于1974年由Warner-Lambert公司从抗生链霉菌的发酵液中分离出来的一种天然的核苷类抗生素，对腺苷脱氨酶具有极强的抑制效果，在临床治疗恶性肿瘤方面有广泛应用。但因其生产成本高、市售价格较为昂贵，目前难以满足需求。2018年中国科学院上海植物生理生态研究所王成树研究团队首次发现，蛹虫草能够高水平的合成具有抗癌活性的喷司他丁，这一发现为蛹虫草的抗癌活性提供了充分的分子证明。

图1喷司他丁结构式

原理

试样经超纯水提取、定容、离心后，取上清液过滤膜，经C18高效液相色谱柱分离，依据保留时间定性，用外标峰面积定量。

试剂和材料

除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中规定的三级水要求，色谱用水符合GB/T6682中规定的一级水要求。

除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中规定的三级水要求，色谱用水符合GB/T6682中规定的一级水要求。

5.1喷司他丁标准品（CAS：53910-25-1）:纯度≥98%。

5.22.5g/L乙酸铵：甲醇：乙腈（96:2:2）：2.5g乙酸铵定容至1000mL超纯水，混匀，过0.22μm滤膜（5.5）。

5.3喷司他丁标准储备溶液：精确称量5.0mg喷司他丁标准品（5.2），用超纯水溶解并定容至50mL，使用前配制。

5.4喷司他丁标准工作溶液：分别准确吸取一定量的喷司他丁标准储备液（5.4），用超纯水分别将其稀释成浓度为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的工作溶液，使用前配制。

5.5滤膜（有机相）：0.22μm。

仪器和设备

6.1液相色谱仪（带紫外检测器）。

6.2分析天平：感量0.1mg和感量1mg。。

6.3恒温水浴锅。

6.4粉碎机。

6.5离心机。

6.6加热型超声波粉碎机。

7测定方法

7.1试样处理

7.1.1蛹虫草子实体：取蛹虫草干品进行粉碎，过100目筛子，取筛下物样品0.5g（精确至0.01g），加入超纯水80mL，70℃热提取1h，过滤，滤液暂存，离心（8800rpm，10min）去除不溶物，用超纯水定容至100mL,过滤膜（5.5），取滤液供色谱测定。过滤膜的滤液要在24h内完成测定。

7.1.2蛹虫草菌丝体；取蛹虫草干品进行粉碎，取粉碎后样品（过100目筛子）0.5g（精确至0.01g），加入超纯水80mL，70℃热提取1h，过滤，滤液暂存，离心（8800rpm，10min）去除不溶物，用超纯水定容至100mL,过滤膜（5.5），取滤液供色谱测定。过滤膜的滤液要在24h内完成测定。

7.2高效液相色谱参考条件

7.2.1色谱柱：C18柱，柱长250mm、内径4.6mm、粒径5μm，或分离效果相当的其他色谱柱。

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