实验四福医大白细胞计数、网织红细胞计数、血沉.pptVIP

实验四白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定目的掌握显微镜白细胞计数的方法。掌握网织红细胞手工计数的方法。血沉测定（示教）。显微镜白细胞计数（临检指导P32）概述人外周血白细胞单核细胞白细胞淋巴细胞中性分叶核粒细胞粒细胞中性杆状核粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞显微镜白细胞计数原理用白细胞计数稀释液（2%冰醋酸加入1%美蓝或结晶紫数滴）0.38ml，将血液（20μl）稀释20倍，在破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，后充入改良牛鲍计数板，在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。显微镜白细胞计数操作步骤加稀释液：白细胞稀释液0.38ml稀释血液：末梢采血20μl，加入稀释液中混匀溶血：混匀后静置，待液体变为棕褐色充池：同红细胞计数计数：低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。显微镜白细胞计数WBC=N/4×10×20×106=N/20×109/L014.计算03单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。6月~2岁：（11~12）×109/L02成人：（4~10）×109/L初生儿：（15~20）×109/L5.参考值6.注意事项器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正标本采集和稀释应准确加盖玻片方式：WHO推荐“推式”法充液的影响：同红细胞计数计数原则显微镜白细胞计数计数室内的细胞分布要均匀：各大方格间细胞数相差不超过10%，否则应重新重池。调整计数白细胞的数量或稀释倍数:细胞数量过少，可扩大计数域(计8或9个大方格)或加大取血量；细胞数量过多，可增加稀释液至0.79ml或仅加血10μl。去除有核红细胞的影响：实际白细胞数/L=100×校正前白细胞数/（100+有核红细胞）7.方法学评价显微镜计数法是传统的白细胞计数法，并可用于校准血细胞分析仪，但其精密度和重复性欠佳。用于校准血液分析仪时应在严格规范的条件下进行。而校准的血液分析仪在严格规范的条件下，精密度和准确性较高。显微镜白细胞计数血液分析仪检测速度快，适合大规模健康人群普查，但需特殊仪器，当某些人为或病理情况（如外周血有核红细胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干扰白细胞计数。第一章显微镜白细胞计数临床意义白细胞在生理或病理情况下均可有差异。多数与中性粒细胞数量变化一致。网织红细胞计数（临检指导P26）1.原理网织红细胞（Ret）是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜碱性物质，故经煌焦油蓝/新亚甲蓝染液活体染色后，可见有蓝绿色点状、线状、颗粒状或网状结构，故名网织红细胞。2.操作步骤（玻片法）网织红细胞计数加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自然干燥后备用。加血液：取血1滴，滴在染料上，用推片角轻轻将血滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此玻片上（尽量不留气泡），室温下静置15~20min。制备涂片。油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞数（一般连续计数3个视野即可）。也可用米勒氏窥盘（Milleroculordisc）置入接目镜内进行计数（如下图）。具体方法是以窥盘的A区计数红细胞，B区计数网织红细胞，由于B区的面积为A区的9倍，故计算如下：网织红细胞（%）=B区网织红细胞数/A区红细胞数×9×100%网织红细胞计数网织红细胞分数数=计数的网织红细胞数/1000网织红细胞绝对数=红细胞数/L×网织红细胞分数数3.计算正常成人：0.5%~1.5%新生儿：2%~6%成人网织红细胞绝对值：（24~84）×109/L4.参考值01025.注意事项（1）只有活体染色后才能看到网织红细胞，故必须将新鲜血滴与染液相混合，染液与血液之比一般约为1：1，但若贫血严重也可按1：2关系处理。注意混匀，否则有时凝固。（2）染色时间不得短于10min，否则可能着色不佳。计数前注意多部位观察，可与涂片的体尾交界处选染色好，红细胞分布既不分散又不重叠的区域进行计数。经此种染色后红细胞呈清晰的蓝绿色，凡胞质中含有蓝绿色点状、短线状结构者为网织红细胞。二、网织红细胞计数网织红细胞计数时需注意与异物或假象相区别。如有