原创力文档- 1、本文档共2页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
AMAMFSJp0015维生素A高效液相色谱法定量
AMAMFSJp0015
维生素A的高效液相色谱法定量测定
本方法几乎适用于所有的食品中维生素A的测定。
无醛乙醇：在1L乙醇中加入5mL50%的KOH溶液及5gZn粉进行2h的回流后蒸馏之。除去初馏液和后馏液各10%；
无水Na2SO4：将无水Na2SO4在120℃的温度下加热2h后，在干燥器中放冷、保存；
维生素A醇：维生素A乙酸酯碱化后可得维生素A醇。计算出其国际单位IU（或μg），用时进行调制；
维生素A醇标准溶液：用异丙醇制备浓度为5IU/mL、25IU/mL、50IU/mL的维生素A醇溶液。用时进行调制。
碱化用150mL褐色烧瓶；
分液漏斗：(250～300)mL,褐色；
蒸馏用烧瓶：250mL，褐色，梨型；
高效液相色谱仪：带有荧光检测器。
准确称取(20～30)IU(6～9μg)维生素A于碱化烧瓶中，加入30mL的乙
醇和1mL的10%的邻苯三酚乙醇溶液，充分搅拌后，加入3mL90%（W/V?）KOH溶液，连接好回馏冷却器，在沸腾的水浴中进行30min碱化。快速冷却至室温后，加入30mL的水，移置于褐色的分液漏斗中。将烧瓶依次用10mL水、30mL石油醚清洗，洗液移置于褐色的分液漏斗中，充分振荡、摇匀、放置后，将水层移置于另一褐色的分液漏斗中，依次用30mL石油醚萃取2次，合并萃取液，用10mL的水清洗一次，再依次用50mL水清洗3次，进一步每次用50mL水清洗至酚酞指示液无色为止。
将分液漏斗中的石油醚层加无水Na2SO4进行脱水后，移至褐色烧瓶中，进
一步每次用10mL石油醚清洗残留的Na2SO4两次，洗液移至烧瓶中。将石油醚醚萃液在（40～45）℃条件下进行减压蒸馏，其残留物中加入异丙醇溶解，取1mL（VmL）作为试验溶液。
3.2.高效液相色谱条件：
×250mm)
移动相：乙醇:水（95:5）
检测器：荧光检测器（激发波长340nm，发射波长460nm）
3.3.定量：将20μL（υμL）的试验溶液注入色谱柱中，取维生素A醇的峰高。
3.4.作工作曲线：在同样的色谱条件下，分别取5IU/mL,25IU/mL,50IU/mL的维生素A醇
标准溶液20μL，注入色谱柱中，以各浓度所对应的峰高作工作曲线。
通过工作曲线求出υμL中维生素A醇的IU单位数（或μg）[S[IU(μg)]],利用下式计算100g试料中维生素A的IU单位数（或μg）。
试料为油脂的情况下：
100g试料中维生素A的量[IU(μg)]=
S[IU(μg)]×[V(mL)×1000/υ(μL)]×[100/试料取样量（g）]
将油脂从试料中提取出的情况下：
100g试料中维生素A的量[IU(μg)]=
S[IU(μg)]×[V(mL)×1000/υ(μL)]×[100/试料取样量（g）]×X/100
X：试料中油脂的百分数
：
《卫生试验法·注解》2000版日本药学会编
文档评论（0）