病毒分离鉴定.ppt

红细胞吸附正常细胞（1）血吸附作用吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒。第31页，共54页，星期日，2025年，2月5日（2）血凝作用血凝试验血凝抑制试验有血凝素（HA）的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，原理是相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合.第32页，共54页，星期日，2025年，2月5日四、电子显微镜检查病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直接观察病毒粒子。第33页，共54页，星期日，2025年，2月5日透射电子显微镜第34页，共54页，星期日，2025年，2月5日1.正染法：超薄切片法取材固定戊二醛四氧化锇清洗与脱水浸透包埋聚合切片染色铀染铅染第35页，共54页，星期日，2025年，2月5日鸡痘病毒（超薄切片）第36页，共54页，星期日，2025年，2月5日超薄切片法的优缺点：优点：可观察病毒形态和形态发生过程缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存第37页，共54页，星期日，2025年，2月5日2.负染技术负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外周的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小。铜网样品滤纸1-2分钟后电镜观察染液（常用磷钨酸）第38页，共54页，星期日，2025年，2月5日关于病毒分离鉴定第1页，共54页，星期日，2025年，2月5日病毒材料采集与检验结果的关系采取标本的时期检查病毒及其成分测定抗体潜伏期及前驱期刚发病或急性期恢复期及康复期较难查见最多查见很难查见未增多未增多或增多不明显明显增多（常超过4倍）第2页，共54页，星期日，2025年，2月5日一、标本的处理（一）除菌处理粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4℃过夜。鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4℃作用4小时。对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒等，则可加入等量的乙醚4℃过夜除菌。第3页，共54页，星期日，2025年，2月5日（二）研磨和稀释对脑、脊髓等组织标本首先应经研磨器或乳钵中充分研磨后，加稀释液（pH7.6肉汤或10％脱脂牛乳生理盐水或0.5％水解乳蛋白Hanks液）制成组织悬液，然后经2000转／分离心20分钟。必要时可加抗生素处理（同上）。第4页，共54页，星期日，2025年，2月5日病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。二、病毒的分离培养?第5页，共54页，星期日，2025年，2月5日(一）动物接种法接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。第6页，共54页，星期日，2025年，2月5日动物接种的优缺点：优点：（1）不需要复杂的仪器设备；（2）技术简单；（3）易成功缺点：（1）个体差异大（2）价格昂贵（3）数量有限（4）需要隔离畜舍第7页，共54页，星期日，2025年，2月5日（二）鸡胚接种1.鸡卵的选择一般都选新鲜、10天以内的受精卵以保证规格质量上的一致。2.孵育孵育时可将鸡卵放入卵箱内进行,气室向上，孵育的最适温度为38--39℃，相对湿度为40—70％，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。第8页，共54页，星期日，2025年，2月5日3.检卵鸡卵孵育4～5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况（二天一次）。（1）未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。（2）活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管，鸡卵内有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。第9页，共54页，星期日，2025年，2月5日（3）死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩张、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。鸡胚孵育完毕后，用铅笔划出气室边缘和胚胎的位置待用。第10页，共54页，星期日，2025年，2月5日鸡胚羊膜腔接种：用12～14天鸡胚，将检材注入羊膜