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第34讲基因工程(一);一基因工程的基本概念
1.基因工程的概念;原核生物;同种限制酶切割产生的黏性末端。
不同限制酶切割产生的黏性末端相同。;基因工程概念及基本工具;;②酶起作用时需要以一条DNA链为模板,而酶不需要模板。;基因工程概念及基本工具;基因工程操作中,真正被用作载体的质粒,都是天然质粒的基础上进行过__________的;这些质粒上常有特殊的标记基因,便于___________________。;基因工程概念及基本工具;抗虫棉的培育过程;1.目的基因:
在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞或获得预期等的基因。
2.筛选合适的目的基因的方法
①从相关的已知的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。
②利用和序列比对工具进行筛选。
3.目的基因的获取
①人工合成。
②利用扩增目的基因
③从基因文库中获取;基因工程的基本操作程序;(3)扩增的过程
a.目的基因DNA受热变性后解为单链,________与单链相应互补序列结合;然后以___________为模板,在_____________作用下进行________,即将4种脱氧核苷酸加到引物的______端,如此重复循环多次。
b.每次循环一般可以分为____________________三步。
(4)PCR的扩增结果:DNA分子以形式扩增(约为2n,其中n为扩增循环次数)
(5)PCR产物的鉴定:常采用__________________来鉴定。;(6)PCR技术的过程;变性90℃以上;1.为什么要用2种不同的引物?
2.如果循环n次,共合成几个DNA分子?共需消耗多少对引物?
3.PCR扩增的是完整的模板DNA分子吗?
4.在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段?;【检测】一个DNA,一对引物(A与B),通过PCR扩增n次:
①子代DNA分子中,等长链DNA分子数为:______个
②子代DNA分子中,不等长链DNA分子数为:_______个
③子代DNA分子中,含模板链DNA分子数为:_______个
④子代DNA分子中,含引物A(或B)的DNA分子数为:______个
⑤复制过程中共需引物____________个
⑥第n次复制需要引物_________个;【检测】下图为某质粒限制酶的酶切图谱。某基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的该基因与该质粒重组,则扩增的该基因的两端需要分别引入下列哪两种限制酶的识别序列?()。;D项:第四轮循环即DNA复制4次,共形成24=16个DNA分子,其中含有最初模板链的2个DNA分子含有引物A或引物B,其余14个DNA分子均含有引物A和引物B,所以第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为14/16=7/8;基因工程的基本操作程序;;;内含子:不能编码蛋白质的序列,大多数真核生物转录后会在加工中去除
外显子:可以编码蛋白质的序列;基因工程的基本操作程序;基因工程的基本操作程序;二基因表达载体的构建——基因工程的核心;基因工程的基本操作程序;农杆菌细胞内的Ti质粒的可携带目的基因整合到
受体细胞的上。;基因工程的基本操作程序;基因工程的基本操作程序;个体生物学水平的鉴定具体方法举例;探究实践:DNA的粗提取与鉴定;2.方法步骤;基因工程的相关实验;基因工程的相关实验;基因工程的相关实验;条带;基因工程的相关实验;第35讲基因工程(二);基因工程的应用;三基因工程在食品工业方面的应用;蛋白质工程原理和应用;蛋白质工程原理和应用;①改造后的基因可以遗传给下一代,被改造的蛋白质无法遗传。
②蛋白质具有十分复杂的空间结构,基因的结构相对简单,容易改造。;生物技术的安全性和伦理问题;生物技术的安全性和伦理问题;生物技术的安全性和伦理问题;生物技术的安全性和伦理问题;生物技术的安全性和伦理问题;PCR技术与细胞内DNA复制的比较;①制作出与目的基因序列相同的有同位素标记的DNA片段,并用PCR扩增(基因探针)
②提取受体细胞全部DNA或mRNA,与基因探针置于同一培养液。
③高温变性处理,使之全部变为单链,观察是否出现杂交DNA片段。;(3)若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物,步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是__________(从引物①②③④中选择,填编号)。;B;(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对图中
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