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试验一、血涂片的制备和染色

【原理】将一小滴血液匀称涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。

用含青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。细胞中的碱性物质

如RBC中的血红蛋白与嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料

伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质与嗜碱性粒细胞质

中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗

粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。

【器材】

1.载玻片运用前，必需细致清洗，并用乙醇或软布清洁。

2.推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用

坡璃切割刀裁去两角，制成约15mm宽度的推片。

3.吸耳球。

4.显微镜。

5.酒精灯。

6.采血针。

7.注射器和针头。

【试剂】

1.瑞氏(Wright)染液

(1)I液:包含瑞氏染料LOg、纯甲醇(AR级以上)6ml、甘油15ml。

将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇渐渐地研磨(至少

3min),以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入

干净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如

此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油密闭保

存。

(2)II液：磷酸盐缓冲液(pH6.4~6.8),包含磷酸二氢钾(KH2POJ

.3g、磷酸氢二钠(NaHPO).2g、蒸镭水加至1mL配好后用磷酸

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盐溶液校正pH,塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用簇新蒸僧水代替。

2.吉姆萨染液包含吉姆萨染料.75g、甘油35ml、甲醇65ml。将

吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每混匀3次，连续4

，最终过滤备用。

3.瑞-吉复合染液

(1)I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料.3g、甲醇5ml、中性甘

油1ml。将瑞氏染料和吉姆萨染料置干净研钵中，加少量甲醇，研磨片刻，

再吸出上液*如此连续几次，共用甲醇52。收集于棕色玻璃瓶中，每

早、晚各摇3min,共5d,以后存放1周即能运用。

⑵II液即磷酸盐缓冲液(PH6.4〜6.8)。包含无水磷酸二氢钾6.64g、

无水磷酸氢二钠2.56g,加少量蒸僧水溶解，用磷酸盐调整pH,加水至

1mlo

【操作】

1.采血

(1)静脉采血法：用EDTAK抗凝1~2h内的标本，运用玻棒、毛细

管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血，直径约4mm。

(2)皮肤采血法：择第三、四手指，并先采红细胞、白细胞计数,

再采血1滴置干净玻片上用于血涂片制备。

2.制作涂片左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手

持推片从后方移动接近血滴，使血液沿推片边缘绽开，将推片与载玻片呈

3。〜45。角，用匀称速度向前将血液推成厚薄相宜的血涂片，血涂片应呈

舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。全部血液必需在推片到达末端前

用完。推大于一片血片。贫血病人推片速度要快。

3.干燥涂片

空气干燥：快速干燥。

4.标记涂片在载玻片的一端用记号笔编号，注明患者姓名或门诊/

住院号。

5.染色

(1)瑞氏染色法：待血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色

时染液外溢。然后将玻片平置于染色架上，滴加染液(I液)3~5滴，使

其快速盖满血涂片，约05~lmin后，滴加等量或稍多的缓冲液