分子生物学技术.pptVIP

3.DNA重組技術分子生物學技術一、基本技術1.分光光度技術有色溶液對光線有選擇性的吸收作用，不同物質由於其分子結構不同，對不同波長線的吸收能力也不同，因此，每種物質都具有其特異的吸收光譜。有些無色溶液，雖對可見光無吸收作用，但所含物質可以吸收特定波長的紫外線或紅外線。分光譜來鑒定物質性質及含量的技術，其理論依據是(分光光度法)主要是指利用物質特有的Lambert和Beer定律。分光光度技術的基本應用：測定溶液中物質的含量用紫外光譜鑒定化合物BECKMANDUSERIES6002.電泳技術電泳是指帶粒子在電場中向與自身帶相反電荷的電極移動的現象。例如蛋白質具有兩性電離性質。當蛋白質溶液的pH在蛋白質等電點的堿側時，該蛋白質帶負電荷，在電場中向正極移動，相反則帶正電荷，在電場中向負極移動，只有蛋白質溶液pH在蛋白質的等電點時靜電荷是零，在電場中不向任何一極移動。用支持體的電泳技術1).紙上電泳2).醋酸纖維薄膜電泳3).薄層電泳4).非凝膠性支持體區帶電泳（支持體有：澱粉，纖維素粉，玻璃粉，矽膠等)5).凝膠支持體區帶電泳①澱粉液②聚丙烯醯胺凝膠③瓊脂（糖）凝膠不用支持體的電泳技術1).微量電泳2).顯微電泳3).等電點聚焦電泳技術4).等速電泳技術5).密度梯度電泳3.放射性同位素技術放射性同位素的原子核很不穩定，會不間斷地、自發地放射出射線，直至變成另一種穩定同位素，這就是所謂“核衰變”。放射性同位素在進行核衰變的時候，可放射出α射線、β射線、γ射線和電子俘獲等。放射性同位素放射出的射線碰到各種物質的時候，會產生各種效應，它包括射線對物質的作用和物質對射線的作用兩個相互聯繫的方面。例如，射線能夠使照相底片和核子乳膠感光；使一些物質產生螢光；可穿透一定厚度的物質，在穿透物質的過程中，能被物質吸收一部分，或者是散射一部分，還可能使一些物質的分子發生電離；另外，當射線輻照到人、動物和植物體時，會使生物體發生生理變化。放射性同位素的應用——同位素示蹤法同位素示蹤法（isotopictracermethod）是利用放射性核素作為示蹤劑對研究對象進行標記的微量分析方法。示蹤實驗的創建者是Hevesy。Hevesy於1923年首先用天然放射性212Pb研究鉛鹽在豆科植物內的分佈和轉移。繼後Jolit和Curie於1934年發現了人工放射性，以及其後生產方法的建立（加速器、反應堆等），為放射性同位素示蹤法的更快的發展和廣泛應用提供了基本的條件和有力的保障。同位素示蹤法在分子生物學中的應用放射性同位素示蹤法在生物化學和分子生物學領域應用極為廣泛，它為揭示體內和細胞內理化過程的秘密，闡明生命活動的物質基礎起了極其重要的作用。近幾年來，同位素示蹤技術在原基礎上又有許多新發展，如雙標記和多標記技術，穩定性同位素示蹤技術，活化分析，電子顯微鏡技術，同位素技術與其它新技術相結合等。由於這些技術的發展，使生物化學從靜態進入動態，從細胞水準進入分子水準，闡明了一系列重大問題，如遺傳密碼、細胞膜受體、RNA-DNA逆轉錄等，使人類對生命基本現象的認識開闢了一條新的途徑。同位素示蹤技術在生物化學和分子生物學中應用的幾個主要方面：1）物質代謝的研究應用適當的同位素標記物作示蹤劑分析物質中同位素含量的變化，知道它們之間相互轉變的關係。2）物質轉化的研究同位素示蹤技術的應用，使有關物質轉化的實驗的週期大大縮短，而且在離體、整體、無細胞體系的情況下都可應用，操作簡化，測定靈敏度提高，不僅能定性，還可作定量分析。3）動態平衡的研究闡明生物體內物質處於不斷更新的動態平衡之中，是放射性同位素示蹤法對生命科學的重大貢獻之一，向體內引入適當的同位素標記物，在不同時間測定物質中同位素含量的變化，就能瞭解該物質在體內的變動情況，定量計算出體內物質的代謝率，計算出物質的更新速度和更新時間等等。4）生物樣品中微量物質的分析在放射性同位素示蹤技術被應用之前，由於製備樣品時的丟失而造成回收率低以及測量靈敏度不高等問題，使得對機體正常功能起很重要作用的微量物質不易被測定。近年來迅速發展、應用愈來愈廣泛的放射免疫分析（radioimmunoassay）技術是一種超微量的分析方法，它可測定的物質300多種，其中激素類居多，包括類固醇激素，多肽類激素，非肽類激素，蛋白質物質，環核苷酸，酶，腫瘤相關的抗原，抗體以及病原體，微量藥物等其他物質。5）最近鄰序列分析法放射性同位素示蹤技術對蛋白質生物合成的研究，從DNA複製、RNA轉錄到蛋白質翻譯均起了