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植物的单细胞培养

1、植物的单细胞培养

在适宜的条件下，一个来自已分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培

养可以发育成同其亲本一样的完整植株。

植物组织培养技术的重要理论基础是植物细胞的全能性。

2、植物单细胞培养的意义

（1）有利于观察细胞个体的分裂、分化、生长和繁殖情况；

（2）有利于获得纯细胞系；

（3）有利于进行细胞特性、细胞生长规律、细胞代谢过程及其调节控制规

律等方面的研究；

（4）有利于生物转化和天然化合物的生产。

3、植物单细胞的分离技术

（1）从外植体直接分离单细胞

外植体经过切割、捣碎或酶解，然后经过一定孔径的不锈钢筛网过滤，得到

细胞悬浮液。

（2）从愈伤组织分离单细胞

将愈伤组织进行振荡培养，使其分散成小的细胞团或单细胞，然后用适当孔

径的不锈钢筛网过滤，除去大的细胞团和残渣，离心除去小的残渣，得到单

细胞悬浮液。

（3）通过原生质体再生法获得单细胞

外植体、愈伤组织或细胞团经过纤维素酶和果胶酶等的作用，除去细胞壁而

获得原生质体。

4、植物单细胞的培养方法

（1）平板培养法

单细胞悬浮液的制备（外植体、愈伤组织、原生质体）→单细胞悬浮液的密

度调整（调整后的密度为植板细胞密度的2倍）→固体培养基的配制→单

细胞悬浮液与固体培养基等量混合→暗培养（培养期间对细胞频繁的镜检

会对细胞的生长产生有害作用，应尽量减少镜检次数）→继代培养（选取

生长良好的由单细胞形成的细胞团，可以获得由单细胞形成的细胞系）。

特点：

操作简便，分离单细胞系较容易，但培养细胞气体交换不畅。

（2）看护培养法

将生长活跃的愈伤组织接种在固体培养基上→在愈伤组织块上方放置一片面

积为1cm2的无菌滤纸，滤纸下方紧贴愈伤组织→借助于微型移液管从细胞

悬浮液中提取适量单细胞悬浮液，然后接种在无菌滤纸上面→将在滤纸上由

单细胞形成的细胞团转移到新鲜的固体培养基中进行继代培养，获得由单细

胞形成的细胞系。

（3）微室培养法

借助于微型移液管从细胞悬浮液中提取适量单细胞悬浮液，置于一张无菌载

片上。在这滴培养液四周与之隔一定距离加上一圈石蜡油，构成微室的”围

墙”，在围墙左右两侧再各加一滴石蜡油，每滴之上置一张盖片作为微室的“支

柱”→将第三张盖片架在两个“支柱”之间，构成微室的“屋顶”→单细胞

悬浮液在微室中→当细胞团长到一定大小时揭掉盖片，把细胞团转移到新鲜

培养基上培养。

微室培养的优点：

①有利于对细胞特性的研究

②有利于对单个细胞的生长、分裂、分化等情况进行全程跟踪研究。