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MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验

MM_FS_CNJ_0335

出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法

本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。其他食品可参照使用。

2.1.1.如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于－15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。

±0.2，于37℃水浴培养4h（以增菌液达到37℃时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内，摇匀，于42±1℃培养20±±0.2，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。

2.2.1.冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄）

2.2.1.1.按2.1.1解冻和保存样品。

±0.2，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。

2.2.2.干蛋品（鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉）

±0.2，于37℃培养20～24h，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250mL玻璃瓶内，混匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。

3.1.将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环分别挑取1环，分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个（必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用），于37℃培养24±2h。

3.2.观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落，如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。

沙门氏菌属的菌落特征见表1。

琼脂平板

菌落特征

沙门氏菌

亚利桑那菌

亚硫酸铋琼脂

棕褐色或灰色至黑色，有时有金属光泽，周围培养基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰绿色，周围培养基不变或微变暗

黑色，周围培养基一般不变黑或微变黑，有些菌株呈灰绿色，带黑心或不带黑心

胆硫乳琼脂

无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色，有些菌株无色半透明

乳糖阴性菌株，相似于沙门氏菌菌落，乳糖阳性菌株为粉红色有暗色中心

亚利桑那菌琼脂

黄色有暗蓝色中心，周围培养基中有黄色沉淀物

粉红色有黑色中心，有时为全黑色，周围培养基呈红色，被发酵卫矛醇或蔗糖的细菌包围时，菌落边缘可为浅黄色

4.1.1.每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落，分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管，接种后无须灭菌接种针，直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养24±2h。

4.1.2.挑取菌落后的琼脂平板，应置于4～8℃至少保留24h，以备必要时复查。

4.1.3.按表2或表3结果进行判断。

三糖铁琼脂

赖氨酸脱

羧酶培养基

初步判断

斜面

底层

产气

硫化氢

K

A

＋（－）

＋（－）

＋

可疑沙门氏菌属

可疑沙门氏菌属

可疑亚利桑那菌

非沙门氏菌属

非沙门氏菌属

K

A

＋（－）

＋（－）

－

A

A

＋（－）

＋（－）

＋

A

A

＋（－）

＋（－）

－

K

K

＋／－

＋／－

＋／－

注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸，——阴性反应；＋／——阳性或阴性反应。

三糖铁琼脂

尿素酶琼脂

初步判断

斜面

底层

产气

硫化氢

K

A

＋（－）

＋（－）

－

可疑沙门氏菌属

A

A

＋（－）

＋（－）

－

可疑亚利桑那菌

K

A

＋（－）

＋（－）

＋

非沙门氏菌属

A

A

＋（－）

＋（－）

＋

非沙门氏菌属

K

K

＋／－

＋／－

＋／－

非沙门氏菌属

注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－阴性反应；＋／－－阳性或阴性反应。

4.2.1.将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物，按表4进行生化试验（表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见4.1结果，不再另做）。

序号

生化项目

反应

沙门氏菌

亚利桑那菌

1

尿素酶试验

－

－

2

V－P试验

－

－

3

氰化钾试验

－

－

4

赖氨酸脱羧酶试验

＋

＋

5

吲哚试验

－

－

6

丙二酸钠试验

－

＋

7

卫矛醇试验

d

－

注：＋－阳性反应；－－阴性反应；d－反应不定。

℃培养24±2h。

4.2.3.生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按4.3进行。

在洁净的玻片上加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的混蚀悬液，将玻片轻轻摇动30～60s，在黑色背景下观察反应（最好用放大镜观察）。如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物，即认为有自凝性。反之无自凝性。

“O”抗原

对无自凝性的培养物，按照4.3.1的程度进行试验，但以多价“O”血清代替生理盐水，在2min内判断结果。如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。如为阴性结果，必要时，可结合4.2结果按4.3.3进行试验，再以多价和单价“O