MM_FS_CNJ_0107出口肉及肉制品中林可霉素残留量检验方法.docVIP

MM_FS_CNJ_0107出口肉肉制品林可霉素残留量纸色谱法

MM_FS_CNJ_0107

出口肉及肉制品中林可霉素残留量检验方法

1.适用范围

本方法适用于出口猪肉中林可霉素残留量的检验。

试样中林可霉素残留用缓冲溶液(pH8.0)提取。提取液经离心后取上清液与藤黄微球菌作用，根据产生抑菌圈的大小用标准曲线法定量。必要时，用纸色谱法进行确证。

林可霉素标准品：已知纯度≥85.4%，由卫生部药品生物制品检定所提供，或等效品；

磷酸盐缓冲液(pH8.0)：称取33.46g无水磷酸氢二钾及1.046g无水磷酸二氢钾，溶于水中并定容至1000mL；

试验菌种：藤黄微球菌(Micrococcusluteus)，由卫生部药品生物制品检定所提供，菌号CMCC28001；

林可霉素标准贮备液：称取一定量林可霉素标准品(精确至0.1mg)，用磷酸盐缓冲液溶解并稀释，配成浓度为100μg/mL的林可霉素标准贮备液，保存于4℃冰箱中(不宜超过一个月)；

μg/mL的标准工作液，作为绘制标准曲线用。需当天配制，当天使用；

培养基1(附录A中A1)；

培养基2(附录A中A2)；

培养基3(附录A中A3)；

生理盐水：称取8.5g氯化钠，溶解于1000mL水中，于121℃，高压灭菌15min。

展开剂：磷酸盐缓冲液甲醇(1＋1)。

培养皿：内径90mm、底部平整、光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦盖；

±±0.1)mm，高(10±0.1)mm；

克氏瓶：800mL；

游标卡尺：测量范围0～200mm，精度0.02mm或抑菌圈测量仪；

绞碎机：电动；

均质器：10000r/min，带均质杯(300mL)；

离心机：8000r/min；

水浴锅：恒温±1℃；

恒温培养箱：(30±1)℃，搁板应保持水平；

高压灭菌器；

×8cm×23cm；

色谱缸：20cm×15cm×30cm；

色谱纸：6cm×20cm滤纸；

微量注射器：10μL或50μL。

以不超过2500件为一检验批。

同一检验批的产品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

批量，件

最低抽样数，件

1～25

1

26～100

5

101～250

10

251～500

15

501～1000

17

1001～2500

20

按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋小包装重量超过2kg者，可用灭菌刀具从包件中割取不少于100g，作为原始样品。原始样品总量不少于2kg。混合后，置于清洁容器内，加封并标明标记，及时送交实验室。

从混合原始样品中取出部分代表性样品，将可食部分放入绞碎机内绞碎，充分混匀，用四分法缩分成不少于500g，作为试样。装入清洁容器内，加封后标明标记。

将试样于－18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

称取30g试样(精确至0.1g)于均质杯内，加入5mL磷酸盐缓冲液，以8000r/min均质2min，转入离心管中，以8000r/min离心10min。按上述各步骤再重复两次，合并三次上清液。用1mol/L氢氧化钠溶液将其调至pH8.0，以磷酸盐缓冲液定容至20mL，再离心，取上清液作为样液。

将菌种接种于培养基1中，混匀，置(30±1)℃培养(24±2)h。再转种到培养基2斜面上，置(30±1)℃培养16～18h后，加入3mL培养基1，洗下菌苔。吸取1mL此溶液转移至克氏瓶中培养基2的表面，置(30±1)℃培养(24±2)h。用15mL生理盐水洗下琼脂表面上的菌苔，制成菌悬液，置4℃冰箱保存(可保存2周)。

μg/mL林可霉素标准工作液对上述菌悬液的用量进行预测试。以不同量的菌悬液加入经熔化并冷却至45～50℃的培养基3中，经充分混合并经(30±1)℃培养(18±1)h后，选择能使该标准工作液产生直径为18.50mm(±10％)清晰、完整的抑菌圈的菌悬液，加入量为菌悬液的最佳用量。

将培养基3熔化，冷却至40～45℃，加入最佳用量(从5.3中求得)菌悬液使其充分混合后，取7.5mL注入灭菌培养皿中，保持水平，待凝固制成检定平板。所用平板需当天制备。

μ°μμg/mL参考浓度溶液将得出45个抑菌圈直径的数值，而其他浓度的标准工作液将得出各9个抑菌圈的数值。

将陶瓦盖盖好，置(30±1)℃培养(18±μμg/mL)的所有45个抑菌圈直径数值的平均值。用45个参考浓度抑制圈直径的平均值与每组中