高效液相色谱分类及工作原理.ppt

要视不同情况而定。例如，分离有机酸和有机碱时，这些酸碱的离解程度可通过改变流动相的pH值来控制。增大pH值会使酸的电离度增加，使碱的电离度减少；降低PH值，其结果相反。但无论属于哪种情况，只要电离度增大，就会使样品的保留增大。pH值的影响：第31页，共50页，星期日，2025年，2月5日四、离子对色谱法（IPC）离子对色谱法是分离分析强极性有机酸和有机碱的极好方法。离子对色谱法是将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子（称对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种色谱法。第32页，共50页，星期日，2025年，2月5日由于离子对化合物A-B+具有疏水性，因而被非极性固定相（有机相）提取。组分离子的性质不同，它与反离子形成离子对的能力大小不同以及形成的离子对流水性质不同，导致各组分离子在固定相中滞留时间不同，因而出峰先后不同。这就是离子对色谱法分离的基本原理。第33页，共50页，星期日，2025年，2月5日流动相：加有平衡离子（反离子）的极性溶液通过改变流动相的pH、平衡离子的浓度和种类可改变分离的选择性。固定相：非极性的疏水键合相第34页，共50页，星期日，2025年，2月5日五、离子色谱法（IC）抑制型：抑制柱型、连续抑制型分离柱中离子交换树脂的交换容量通常在0.01～0.05毫摩尔/克干树脂非抑制型:当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(0.007～0.07毫摩尔/克干树脂),使用低浓度、低电离度的有机弱酸及弱酸盐作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测器可直接与分离柱相连，不需抑制柱。⒈离子色谱装置类型第35页，共50页，星期日，2025年，2月5日第36页，共50页，星期日，2025年，2月5日关于高效液相色谱分类及工作原理第1页，共50页，星期日，2025年，2月5日第一节高效液相色谱法概述第2页，共50页，星期日，2025年，2月5日第3页，共50页，星期日，2025年，2月5日第4页，共50页，星期日，2025年，2月5日第5页，共50页，星期日，2025年，2月5日一、理论基础：速率理论A为涡流扩散项B/u分子扩散项Cu项即传质阻力项第6页，共50页，星期日，2025年，2月5日二、HPLC技术采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器。三、HPLC特点高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便。第7页，共50页，星期日，2025年，2月5日㈠经典LC与HPLC比较?经典LCHPLC柱之内径1~5cm~0.4cm长度50~100cm15~50cm填充材料粒度150μm~200μm4μm~10μm使用压力1~10atm50~200atm分离时间0.5h~天~10min第8页，共50页，星期日，2025年，2月5日㈡与气相色谱法比较，HPLC的优点分析对象广气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。第9页，共50页，星期日，2025年，2月5日⒉流动相对分离起作用气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。第10页，共50页，星期日，2025年，2月5日⒊经常在室温条件下操作气相色谱法一般在较高温度下进行缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。第11页，共50页，星期日，2025年，2月5日第二节HPLC的主要类型一、液一液分配色谱法（LLPC）在液-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。第12页，共50页，星期日，2025年，2月5日1．分离原理液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离