3.2基因工程的基本操作课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

3.2基因工程的基本操作程序

苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子培育转基因抗虫棉的简要过程1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建目的基因受体细胞3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定

基因通常是有遗传效应的DNA片段DNA片段基因1基因2基因3放大非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游编码区：能转录相应的mRNA，进一步编码（翻译）出蛋白质的DNA区段。非编码区：不能转录为相应的mRNA，不能编码蛋白质的区段。基因的结构

1.原核生物的基因结构启动子终止子编码区非编码区非编码区编码区上游编码区下游连续的、不间隔的RNA聚合酶识别并结合的位点，驱动基因转录出mRNA。启动子本质：位置：作用：是一段有特殊序列结构的DNA片段位于基因上游

1.原核生物的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子连续的、不间隔的终止转录。终止子本质：位置：作用：也是一段有特殊序列结构的DNA片段位于基因下游

2.真核生物的基因结构启动子终止子非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游间隔的、不连续的内含子外显子外显子内含子能转录相应的mRNA，进一步能编码蛋白质的DNA序列。能转录相应的mRNA，但却不能编码蛋白质的DNA序列。

2.真核生物的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子转录初级RNA成熟mRNA剪切、拼接

原核生物真核生物不同点编码区是的编码区是间隔的、的相同点都有能够编码蛋白质的和具有调控作用的区组成的连续不连续编码区非编码非编码序列=非编码区原核基因非编码序列真核基因=非编码区+内含子

1.从基因文库中获取含有某种生物部分基因片段的重组DNA的克隆群体。②cDNA文库的构建——mRNA逆转录形成mRNA杂交双链单链DNA双链cDNA(cDNA)该生物cDNA文库基因组文库中的基因含有启动子、终止子、内含子，cDNA文库中的基因不含以上结构。与载体连接导入受体菌群逆转录酶核酸酶HDNA聚合酶某一发育时期

二、目的基因的获取方法3.利用PCR获取和扩增目的基因1.从基因文库中获取2.通过DNA合成仪直接合成

利用PCR获取和扩增目的基因PCR由穆里斯等人于1985年发明，为此，穆里斯于1993年获得诺贝尔化学奖。PCR是一项根据的原理，在提供参与DNA复制的与，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。DNA半保留复制体外各种组分反应条件PCR——聚合酶链式反应

参与的组分在PCR的作用目的基因DNA4种脱氧核苷酸耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)引物缓冲液Mg2+高温使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸（两种）打开DNA双链提供DNA复制的模板合成DNA子链的原料催化合成DNA子链维持反应体系的pH激活DNA聚合酶的活性体外DNA复制所需的基本条件

第1步：变性5′-3′--3′-5′5′-3′--3′-5′当温度超过90℃时，双链DNA解旋为单链。95℃PCR的过程

5′-3′--3′-5′5′--3′-5′3′-第2步：复性当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。50℃长度相同但C-G含量高的引物需要设定的复性温度较高

5′--3′-5′3′-第3步：延伸5′--3′-5′3′-5′--3′-5′3′-当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。72℃

DNA解链为单链高温(95℃)变性低温(50℃)复性中温(72℃)延伸引物结合到互补DNA链Taq酶从引物起始进行子链的合成PCR过程可以在PCR扩增(PCR仪)中自动完成。

PCR相关计算长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个211引物A引物B扩增一次

中长链-短链DNA____个2长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个233扩增两次

中长链-短链DNA____个4长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个277短链-短链DNA______个2出现完整的目的基因扩增三次

中长链-短链DNA____个6长链-中长链DNA____个含