高三生物二轮复习课件PCR的应用.pptx

;1.全称：；

2.原理：；

3.条件：

①缓冲液：含有，目的是；

②模板：DNA双链；

③原料：4种，既作为又作为；

④酶：的酶；

⑤引物：种，使DNA聚合酶能从引物的端开始连接脱氧核苷酸。;PCR技术的应用;RT－PCR即逆转录—聚合酶链反应：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，利用引物和逆转录酶逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT－PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能，某些病毒的核酸检测就是依据此原理。;对点训练;实时PCR（real－timePCR）是一种定量测定样品中特定DNA片段的聚合酶链式反应（如图所示）。反应中一般使用带有荧光标记的PCR引物，从而能够通过荧光监测每次PCR循环后扩增所得的产物的量。通过连续监测下获得的反应动力学曲线，可推导出样品中模板DNA的初始含量。;实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将标有荧光素的Taqman探针与待测样本DNA混合后，在变性、复性、延伸的热循环中，与待测样本DNA配对结合的Taqman探针被Taq酶切断，在特定光激发下发出荧光(如图所示)，随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值(该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关)。下列有关叙述正确的是()

A．每个模板DNA分子含有2个游离的磷酸基团

B．做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成1种引物和1种Taqman探针

C．在反应过程中，需要细胞中的ATP为新链的合成提供能量

D．荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越少，说明含有的病变的概率越小;PCR技术的应用;1.（2024·河北邢台模拟）PCR引物的3′端为结合模板DNA的关键碱基，5′端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列。下列叙述正确的是（）

A．PCR第5个循环，消耗了16对引物

B．脱氧核苷酸作为扩增的原料会依次连接到5′端

C．PCR反应体系中需要加入脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、Ca2＋等

D．用图中引物扩增至少四个循环后才能获得两端均添加限制酶切点的目的产物;对点训练;对点训练;;;对点训练;PCR技术的应用;;大引物PCR需要用到三条引物进行两轮PCR。

第一轮PCR利用突变上游引物和常规下游引物进行扩增，得到不完整的含有突变位点的DNA片段；第二轮PCR利用第一轮扩增产物中的一条DNA链作为下游大引物，它与常规上游引物一起扩增得到完整的含有突变位点的DNA片段。;;天然胰岛素B链部分氨基酸序列：;;;1.（2023·山东高考节选）科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5。;2、重组PCR技术是一项新的PCR技术，可将来两个不相关的DNA连接起来，组成一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1基因片段，用重组PCR技术构建了LTB-ST融合基因。融合基因的制备过程如图所示。回答下列问题:;(1)设计引物时，引物P1与引物P2的碱基序列(填“能”或“不能”)互补;引物P2与引物P3的碱基序列(填“能”或“不能”)部分互补，原因是。;(4)杂交链延伸生成LTB-ST1融合基因的过程(填“需要”或“不需要”)加入引物。在图标出杂交链两条母链的3端和5端。;3.大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变仅需进行两轮PCR即可获得，第一轮加诱变引物和侧翼引物，第一轮产物作第二轮PCR扩增的大引物，如图表示利用大引物PCR对基因M进行定点诱变。下列说法错误的是（）;