生物分离工程萃取.ppt

①水相的pH值pH对萃取的影响主要体现在改变蛋白质的表面电荷上。在pH小于蛋白质的等电点(PI)时,蛋白质表面带正电荷;大于等电点时,蛋白质带负电荷。AOT是一种阴离子型表面活性剂,它所形成的反胶团的内表面带负电荷。当水溶液的pH小于蛋白质的等电点时,两表面异电荷的吸引力使蛋白质的萃取率接近100%。当pH大于PI时,溶菌酶萃取率急剧下降,直到接近于零。第62页，共123页，星期日，2025年，2月5日第63页，共123页，星期日，2025年，2月5日②盐离子的种类第64页，共123页，星期日，2025年，2月5日③盐浓度盐浓度W0SProZ萃取率第65页，共123页，星期日，2025年，2月5日④温度温度是影响蛋白质萃取率的一个重要因素。一般来说,温度的增加将使反胶团的含水量下降,因而不利于蛋白质的萃取。通过提高温度可以实现蛋白质的反萃取。第66页，共123页，星期日，2025年，2月5日⑤蛋白质分子量和浓度蛋白质的分子量对其萃取率有较大影响。例如溶菌酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶的分子量分别为14300、23300、35000,AOT/异辛烷反胶团萃取它们的最大萃取率分别约为100%、90%、30%,表明分子量越大的蛋白质越难萃取。用AOT反胶团体系萃取血红蛋白时发现,蛋白质浓度高时,萃取率降低;而蛋白质浓度低时,萃取率较高。第67页，共123页，星期日，2025年，2月5日⑥表面活性剂表面活性剂的类型目前最常用的反胶团或微乳液是AOT/异辛烷体系。一是AOT形成的反胶团较大,有利于蛋白质的萃取;二是AOT形成反胶团时不需加入表面活性剂。表面活性剂的浓度当其它条件一定时,表面活性剂浓度也存在某临界值。小于此临界值时,增大表面活性剂的浓度可提高蛋白质的萃取率,大于临界值时,则无明显影响第68页，共123页，星期日，2025年，2月5日第69页，共123页，星期日，2025年，2月5日四、反胶团萃取的应用分离蛋白质混合物；?浓缩α-淀粉酶；从发酵液中提取胞外酶；直接提取胞内酶；用于蛋白质复性。第70页，共123页，星期日，2025年，2月5日案例一：通过三步分离操作分离了核糖核酸酶a、细胞色素c和溶菌酶。第71页，共123页，星期日，2025年，2月5日第72页，共123页，星期日，2025年，2月5日通过调节水相pH值和KCl浓度来实现三种蛋白质的分离。在pH=9时，核糖核酸酶的溶解度很小，保留在水相而与其他两种蛋白质分离；相分离后得到的反胶团相（含细胞色素C和溶菌酶）与0.5mol/L的KCl水溶液接触后，细胞色素C被反萃取到水相，而溶菌酶留在反胶团相；含溶菌酶的反胶团与2.0mol/LKCl，pH值为11.5的水相接触后，将溶菌酶反萃至水相中。第73页，共123页，星期日，2025年，2月5日案例二：使用二级混合-分离型萃取流程，用TOMAC/0.1%辛醇-异辛烷的溶液体系连续分离?-淀粉酶，浓缩了17倍。(图)第74页，共123页，星期日，2025年，2月5日第75页，共123页，星期日，2025年，2月5日案例三：胞内酶的提取第76页，共123页，星期日，2025年，2月5日大量的研究工作已经证明了反胶团萃取法提取蛋白质的可行性与优越性。不管是自然细胞还是基因工程细胞中的产物都能被分离出来;不仅发酵滤液和浓缩物可通过反胶团萃取进行处理,就是发酵清液也可同样进行加工。不仅是蛋白质和酶都能被提取,还有核酸、氨基酸和多肽也可顺利地溶于反胶团。然而反胶团萃取在真正实用之前还有许多有待于研究和解决的问题,例如表面活性剂对产品的沾染、工业规模所需的基础数据;反胶团萃取过程的模拟和放大技术等。尽管如此,用反胶团萃取法大规模提取蛋白质由于具有成本低、溶剂可循环使用、萃取和反萃取率都很高等优点,正越来越多地为各国科技界和工业界所研究和开发。第77页，共123页，星期日，2025年，2月5日第五节超临界流体萃取

（supercriticalfluid,SCF）一、序言超临界流体萃取：是将超临界流体作为萃取溶剂的一种萃取技术，它兼有传统的蒸馏和液液萃取的特征，是适用面很广的一门新型分离技术。第78页，共123页，星期日，2025年，2月5日超临界流体：是一种物质状态，当物质在超过临界温度及临界压力以上，气体与液体的性质会趋近于类似，最后会达成一