生物化学第六章 核酸.pptx

第六章核酸;第一部分核酸通论

核酸的研究历史

重要的DNA研究实验

核酸的种类与生物学功能

核酸的化学组成;一、核酸的研究历史;1930年Levene发现动物细胞的核酸含有一种特殊的核糖－脱氧核糖,得出植物核酸含核糖,动物核酸含脱氧核糖的错误概念，至1938年方清楚RNA和DNA的区别。Levene还提出了核酸的“磷酸－核糖(碱基)－磷酸”的骨架结构,解决了DNA分子的线性问题,还在1935年提出“四核苷酸”,认为这四种碱基的含量是一样的。

1944年，OswaldAvery通过肺炎双球菌转化实验证实了DNA是遗传的物质基础。

1950年Chargaff,E和Hotchkiss,R.D.采用纸层析法仔细分析了DNA的组成成分,得知[A]=[T],[G]=[C],[A+G]=[C+T]

1953年Watson与Crick根据DNA的X射线图谱的研究结果,提出了DNA的双螺旋模型(Doublehelix)。几星期后提出了半保留式复制模型。;1957年MeselsnheStahl用密度梯度超离心法,证实半保留复制假说。

1958年Kornberg得到高纯度的DNApolymerase,这种酶需要一个模板DNA。

1960年Cairns将复制中的细菌DNA电镜照片拍了下来。

1970年发现第一个DNA限制性内切酶。

1972年DNA重组技术的建立。

1978年双脱氧DNA测序法的建立。

1990年人类基因组计划实施。

;2、rRNA

上世纪30年代发现细胞质和细胞核中都有核酸存在，用1924年福尔根发明的染色法去染色，只能使细胞核中的核酸染色。但两种核酸在260nm的吸收非常相似。

1941年，细胞学家J.Brachet和T.Caspersor注意到细胞质中的核酸与蛋白质的合成有密切的关系。

50年代，有人用电子显微镜和物理化学手段发现大肠杆菌细胞质的RNA常常存在于蛋白质合成相关的颗粒中（Ф20nm,用35S进行脉冲式标记的实验证明该颗粒是蛋白质合成的所在地），简称核糖体。

核糖体得到分离后，发现里面含RNA，称rRNA。Watson等发现rRNA的G≠C，A≠U，断定是一单链分子。;3、mRNA

1948年有人报道，当噬菌体感染了细菌后会产生一种很不稳定的RNA，而大多数是和核糖体结合在一起。

BrennerJacob等人用13C、15N标记蛋白质，用32P标记核酸的方法证实了这是一种新的RNA分子，命名为信使RNA,即mRNA(m,messenger)。

1961年，Spielman创造了分子杂交法，通过32P-mRNA-DNA杂交分子证明了mRNA的存在。;4、tRNA

1957年HoaglandM.B.发现一类稳定的不与核糖体结合RNA小分子。

CrickF.比较了核酸和氨基酸的大小和形状后，认为不可能在空间上互补，因此他对核酸→蛋白质的信息传递作了以下预测：1)它是一种分子转换器，使信息从核酸序列转换成氨基酸序列；2)这种分子很可能是核酸；3).它不论以何种方式进入蛋白质翻译系统的模板，都必须与模板形成氢键（即配对）；4)有20种分子转换器，每种氨基酸一个；5)每种氨基酸必定还有一个对应的酶，催化与特定的分子转换器结合。

1963年，Ehrenstein等人用实验证明了Hoagland发现的分子就是Crick预言的分子转换器，即tRNA。

1965年Holley经过7年的努力测出酵母Ala-tRNA序列。;5、遗传密码的破译

1953年Dounce假设DNA通过RNA将信息传给蛋白质，RNA上每三个核苷酸形成一个“空洞”，正好将一个个氨基酸装进去。该假说允许三联体的重叠。

1954年物理学家Gamow，与Teller等人联手，也提出三联体学说，并指出不可重复的特点。

1957年Crick也提出了三联体的假说。他意识到要解决“天书”的“词法”和“句法”，必须要有一本标准词典，以便决定64种组合中的44种是无用的。即“简并密码”和“阅读框”

1961年Crick在BencerS的突变实验的基础上，用重组法得到了+++和---型，发现读框和野生型一致，从而证明了三联体的假说。;1961年Nirenberg,MatthaeiOchoa用生物化学手段开始了密码测试，得到20种氨基酸的密码子的核酸成份。

1964年Khorana合成了U和G交替的多聚核苷酸，所对应的合成肽为VCVCVC，对照密码子的核酸成份可以最终决定。后来合成了UUGUUUGUUG…产生了poly(L),poly(C)和poly(V)。

1964年Nirenberg找到了更妙的突破口，合成三联体，它能与tNRA进行密码子－反密码