生物化学的生物合成.ppt

3?5?3?5?引物是由引物酶催化合成的短链RNA分子。引物3HO5引物酶第54页，共82页，星期日，2025年，2月5日引发体和复制叉的生成第55页，共82页，星期日，2025年，2月5日二、DNA链的延长复制的延长指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐个加入引物或延长中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不断生成。第56页，共82页，星期日，2025年，2月5日535dATPdGTPdTTPdCTPdTTPdGTPdATPdCTPOH33DNA-pol第57页，共82页，星期日，2025年，2月5日领头链的合成：领头链的子链沿着5?→3?方向可以连续地延长。第58页，共82页，星期日，2025年，2月5日参与DNA复制的物质:底物(substrate):dATP,dGTP,dCTP,dTTP；聚合酶(polymerase):依赖DNA的DNA聚合酶，简写为DNA-pol；模板(template):解开成单链的DNA母链；引物(primer):提供3?-OH末端使dNTP可以依次聚合；其他的酶和蛋白质因子。第22页，共82页，星期日，2025年，2月5日复制的基本化学反应是生成磷酸二酯键(dNMP)n+dNTP→(dNMP)n+1+PPi第23页，共82页，星期日，2025年，2月5日聚合反应的特点:DNA新链生成需RNA引物和模板；新链的延长只可沿5?→3?方向进行。第24页，共82页，星期日，2025年，2月5日一、DNA聚合酶催化脱氧核苷酸间的聚合全称：依赖DNA的DNA聚合酶(DNA-dependentDNApolymerase)简称：DNA-pol活性：1.5??3?的聚合活性2.核酸外切酶活性第25页，共82页，星期日，2025年，2月5日5′AGCTTCAGGATA?3′|||||||||||3′TCGAAGTCCTAGCGAC5′3??5?外切酶活性:5??3?外切酶活性:?能切除突变的DNA片段。能辨认错配的碱基对，并将其水解。核酸外切酶活性:第26页，共82页，星期日，2025年，2月5日（一）原核生物有3种DNA聚合酶DNA-polⅠDNA-polⅡDNA-polⅢ第27页，共82页，星期日，2025年，2月5日原核生物的DNA聚合酶第28页，共82页，星期日，2025年，2月5日２个核心酶1个?-复合物（?、?、??、?、?、?6种亚基）1对?-亚基（可滑动的DNA夹子）DNA聚合酶Ⅲ全酶结构全酶结构包括：第29页，共82页，星期日，2025年，2月5日功能：DNA-polⅠ（109kD）对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。二级结构以α螺旋为主，只能延长约20个核苷酸。第30页，共82页，星期日，2025年，2月5日323个氨基酸小片段5????核酸外切酶活性大片段/Klenow片段604个氨基酸DNA聚合酶活性???5?核酸外切酶活性N端C端木瓜蛋白酶DNA-polⅠKlenow片段是实验室合成DNA，进行分子生物学研究中常用的工具酶。第31页，共82页，星期日，2025年，2月5日DNA-polⅡ（120kD）DNA-polII基因发生突变，细菌依然能存活。DNA-polⅡ对模板的特异性不高，即使在已发生损伤的DNA模板上，它也能催化核苷酸聚合。因此认为，它参与DNA损伤的应急状态修复。第32页，共82页，星期日，2025年，2月5日（二）常见的真核细胞DNA聚合酶有5种第33页，共82页，星期日，2025年，2月5日二、DNA聚合酶的碱基选择和校对功能实现复制的保真性复制按照碱基配对规律进行，是遗传信息能准确传代的基本原理。此外还需酶学的机制来保证复制的保真性。第34页，共82页，星期日，2025年，2月5日遵守严格的碱基配对规律；聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能；复制出错时有即时校对功能。DNA复制的保真性至少要依赖三种机制：第35页，共82页，星期日，2025年，2月5日 1.严格遵守碱基配对规律；DN