菊花的组织培养 (3).ppt

生长素细胞分裂素：有利于根的分化生长素细胞分裂素：有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织生长③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响第23页，共44页，星期日，2025年，2月5日4、其他环境条件--pH、温度、光照菊花的组织培养：pH控制在5.8左右温度控制在18－22oC用日光灯照射12h5、消毒-在整个培养的过程中，都需要是无菌环境。第24页，共44页，星期日，2025年，2月5日二、实验操作（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。1、配置各种母液第25页，共44页，星期日，2025年，2月5日①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。1、配置各种母液第26页，共44页，星期日，2025年，2月5日先将称好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热使琼脂熔化，然后加入蔗糖30g，在依次加入母液（分别是大量元素、微量元素、有机物和植物激素母液）加蒸馏水至1000mL，调节PH，最后分装到锥形瓶中，每瓶分装50mL或100mL2、配置培养基先水+琼脂熔化加入蔗糖30g再依次加母液（分别是大量元素、微量元素、有机物和植物激素）加蒸馏水至1000mLPH分装入锥形瓶（装50或100mL由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。第27页，共44页，星期日，2025年，2月5日3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。第28页，共44页，星期日，2025年，2月5日1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。第29页，共44页，星期日，2025年，2月5日②酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。③消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液。第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭擦洗工作台并用紫外线照射20分钟。1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3、材料的切取和接种第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日关于菊花的组织培养(3)第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日专题3植物组织培养课题1：菊花的组织培养第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日离体的植物器官、组织或细胞脱分化再分化愈伤组织第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日组织培养--是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。外植体第6页，共44页，星期日，2025年，2月5日一、植物组织培养的基本过程（基础知识）理论基础：细胞具有（1）什么是全能性？已分化的的细胞具有使发育成完整个体的潜能。（2）原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。全能性第7页，共44页，星期日，2025年，2月5日（3）实例：已分化的植物细胞，仍具有全能性。高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为__________。（4）全能性的比较:受精卵生殖细胞体细胞。（5）全能性表达的条件：离体、营养物质、激素、适宜的条件细胞核含有该物种生长发育所需要的全部遗传物质第8页，共44页，星