生物素亲和素系统相关技术.ppt

第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、生物素-亲和素系统（BAS）一)生物素及活化生物素二)亲和素及链霉亲和素三)生物素-亲和素系统的特点第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日一）生物素及活化生物素(一)生物素1概念：生物素(biotin)是动、植物体内广泛分布的一种小分子生长因子，又名辅酶R或维生素H。2.分子式：C10H16O3N2S分子量：244.31第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日3.结构：（CH2）4COOH结合亲和素结合蛋白质咪唑酮环噻吩环第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日whywhywhy为什么要对生物素进行活化？为什么要对生物素进行活化？第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日我是生物素我可以是抗体，也可以是酶第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日我是亲和素，我来了第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日BrokenHeart第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日我是亲和素，我来了第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日1）生物素分子较小，与蛋白质结合后，由于大分子蛋白质的空间位阻效应，可影响生物素与亲和素间的结合；

2）生物素只能依靠肽键与蛋白质上的氨基结合。

因此，活化生物素可克服以上缺点，既减少空间位阻效应，又可扩大其结合的对象。(二)活化生物素第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日生物素与蛋白质的结合第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.标记蛋白质氨基：N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）、长臂活化生物素（BCNHS）。2.标记蛋白质醛基：酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）。3.标记蛋白质巯基：3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）。4.标记核酸：光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、BNHS和BHZ。第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.标记蛋白质氨基：N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）、长臂活化生物素（BCNHS）。抗体中性和偏碱性蛋白的标记第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.标记蛋白质醛基：生物素酰肼（BHZ）、肼化生物胞素（BCHZ）用于偏酸性糖蛋白的生物素标记第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日标记对象：大分子活性物质：如抗原、抗体。标记后不影响免疫活性。酶：如HRP、葡萄糖氧化酶和ALP等。会降低ALP的活性。(三)生物素标记蛋白质第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日活化生物素可与不同的大分子物质结合，应根据可标记基团的种类及特性，选择相应的活化生物素；抗体：BNHS偏酸性抗原：BHZ核酸：光生物素第16页，共40页，星期日，2025年，2月5日一个蛋白质分子可联结多个生物素分子，即生物素化大分子具有多价性，它是BAS多级放大作用的物质基础。但每个蛋白质上标记的生物素分子数量应控制在一定范围。每个抗原标记1-3个生物素分子为宜；每个抗体标记3-5个生物素分子为宜；生物素：IgG(mg/mg)=2:1，效果较好。第17页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、生物素-亲和素系统（BAS）一)生物素及活化生物素二)亲和素及链霉亲和素三)生物素-亲和素系统的特点第18页，共40页，星期日，2025年，2月5日二）亲和素和链霉亲和素(一)亲和素(avidin，A)1.概念：是动物微生物中提取的一种含10%碳水化物的碱性糖蛋白。2.分子量：680003.结构：4个相同亚基组成的四聚体糖蛋白，富含色氨酸，它是与生物素结合的基团。第19页，共40页，星期日，2025年，2月5日A4.特性：每个亚基都可结合1个生物素分子，即1个亲和素分子可结合4个生物素分子。5.亲和常数：1015/mol6.缺点：由于是碱性蛋白（PI=10），且含糖基，与聚苯乙烯的非特异性吸附较高，会导致本底增大，降低检测灵敏度。第20页，共40页，星期日，2025年，2月5日二）亲和素和链霉亲和素(二)链霉亲和素(streptavidin，SA)：1.概念：是从链球菌属的菌培养液中提取的一种蛋白质。2.分子量：650003.结构：由4个相同的肽链组成，甘氨酸和丙氨酸含量较大。第21页，共40页，星期日，2025年，2月5日