DB22_T1828-2013_农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测_吉林省.docxVIP

ICS67.050

X04

DB22

吉林省

地

方

标

准

DB22/T1828—2013

农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄

球菌的多重PCR检测

DetectionofSalmonella,ShigellaandStaphylococcusaureusinagriculturalproducts

bymultiplexPCRmethod

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T1828—2013

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、吉林农业大学。

本标准主要起草人：邴炜、陈萍、史艳宇、李月红、任常菲、王秀娟、崔敬爱。

I

DB22/T1828—2013

农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测

1范围

本标准规定了农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌核酸的多重PCR检测方法。

本标准适用于农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的快速筛选检测。

本标准不适合仲裁检验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.4食品微生物学检验

沙门氏菌检验

GB4789.5食品微生物学检验志贺氏菌检验

GB4789.10食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

WS/T230临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用

下列术语和定义适用于本标准。

多重聚合酶链式反应（多重PCR）multiplepolymerasechainreaction

多重PCR又称多重引物PCR，是在同一PCR反应体系中加上两对以上引物，同时扩增出多个核酸

1

DB22/T1828—2013

5.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格。

5.2缓冲蛋白胨水（BPW）：按GB4789.4规定。

5.37.5%氯化钠增菌肉汤：按GB4789.10规定。

5.4志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：按GB4789.5规定。

5.5引物：见表1。

表1引物序列

产物长度

终浓度/

(mmol/L)

40

致病菌名称

沙门氏菌

靶基因

invA

nuc

上下游引物序列

/bp

5’-GTCATGATATTCCGCCCCATATT-3’

5’-CGGTGCGATGAAGTTTATCAAAG-3’

5’-GCTCAGCAAATGCATCACAAAC-3’

5’-AGCGTTGTCTTCCGCTCCAAA-3’

5’-GTTCCTTGACCGCCTTTCCGATACCGTC-3’

5’-GCCGGTCAGCCACCCTCTGAGAGTAC-3’

255

506

620

40

120

金黄色葡萄球菌

志贺氏菌

120

80

80

ipaH

5.6细菌基因组DNA提取试剂盒。

5.10分子量标记：100bpDNAMarker。

5.11琼脂糖：电泳纯。

5.1350×TAE电泳缓冲液（储备液）：称取484gTris，量取114mL冰醋酸，200mL0.5mol/LEDTA，

溶于水中，定容至2L。分装后高压灭菌备用。使用前稀释成1×TAE电泳缓冲液（工作液）。

5.146×加样缓冲液：30mmol/LEDTA、36%（体积分数）甘油、0.05%（质量浓度）二甲苯腈蓝FF、

0.05%（质量浓度）溴酚蓝。

5.15阳性质控菌株：来源于正规菌种保藏机构的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌标准菌株。

5.16阴性质控菌株：来源于正规菌种保藏机构的任何非目标菌株。

2

DB22/T1828—2013

6.4恒温培养箱：36℃±1℃，42±1℃。

6.5高压灭菌器。

6.6均质器或灭菌研钵。

6.7高速冷冻离心机：12000r/min以上。

6.8紫外分光光度计或核酸蛋白分析仪。

6.9PCR仪。

6.10电泳装置。

6.11凝胶成像分析系统。

6.12微量移液器：0.2μL~2μL、2μL~10μL、20μL~200μL、100μL~1000μL。

6.13离心管：1.5mL、2mL。

7检验程序

沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌检验程