2025届高三生物一轮复习课件第37讲 基因工程（第2课时）.pptxVIP

目录CONTENTS【新旧教材对比】增：①基因文库的构建；②基因枪法；③基因治疗。改：①PCR技术内容更充实②DNA重组技术改为重组DNA技术③限制性核酸内切酶改为限制性内切核酸酶。淡化：①从基因文库中获取目的基因精减为一句话；②农杆菌转化法变为资料卡。2025届第一轮复习第10单元·生物技术与工程第36讲基因工程及其应用（第2课时）二、基因工程的基本操作程序三、探究·实践：PCR技术及电泳鉴定（P84）一、原核细胞与真核细胞的基因结构

一、原核细胞与真核细胞的基因结构DNA基因1基因2基因3放大转录内含子内含子外显子原核细胞里没有该类酶所以，原核基因的编码区是连续的，不存在外显子与内含子之分。起始密码子终止密码子mRNA单链提取逆转录酶DNA单链DNA双链酶这种双链DNA是不含内含子的DNA，叫做cDNA思考：若把真核基因导入原核细胞中表达，一定会产生原来的蛋白质吗？

二、基因工程的基本操作程序实例：抗虫棉的培育过程苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建（核心）3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定如何筛选和获取？为何要拼接？如何拼接？需要什么工具？将目的基因导入不同生物细胞的方法重组DNA分子需具备哪些条件？目的基因一定能进入受体细胞吗？进入受体细胞后一定能表达吗？

二、基因工程的基本操作程序1.目的基因的筛选与获取问题情境：Bt基因是怎样筛选出来的呢?苏云金杆菌（Bt）制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害对Bt基因的表达产物-Bt抗虫蛋白有较为深入的了解：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白，破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因随着测序技术的发展，以及序列数据库（GenBank）、序列比对工具（如BLAST）等的应用，越来越多的基因的结构和功能为人们所知，为找到合适的目的基因提供了更多机会和可能（P76最后1段--77）筛选合适的目的基因：从相关的________和_________的基因中进行筛选已知结构功能清晰接下来，如何获得目的基因呢？

二、基因工程的基本操作程序1.目的基因的筛选与获取①从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选是较为有效的方法之一。②利用序列数据库和序列比对工具进行筛选。从生物材料获取目的基因生物材料DNARNA一定大小范围的DNAcDNA逆转录基因组文库cDNA文库基因文库获取目的基因PCR导入受体菌中保存限制酶酶切包括已知序列：人工合成①人工合成目的基因②用PCR快速扩增目的基因

二、基因工程的基本操作程序1.目的基因的筛选与获取⑴从基因文库中直接获取：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。类型：基因组文库:部分基因文库包含一种生物的全部基因（cDNA文库）：包含一种生物的部分基因⑵人工合成：（化学合成法、逆转录法）当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。DNA合成仪⑶利用PCR技术获取和扩增（聚合酶链式反应）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的技术。原理：DNA半保留复制备注：如果有两个空，可以回答“DNA分子的热变性原理”

第一次PCR第二次PCR第三次PCR5’5’3’3’5’3’3’5’引1引2123’5’12215’3’5’3’123’5’122112122211引1引2小结：获取目的基因：通过在目的基因两端设计引物进行PCR来实现。PCR技术还可应用于病毒、细菌等病原体的检测（核酸检测），身份识别（DNA指纹）及包括DNA操作在内的一些科学研究中。利用PCR技术获取和扩增目的基因

利用PCR技术获取和扩增目的基因

引物个数的问题（注意和探针个数的问题加以区别）【例】一个目的基因通过PCR技术扩增n次时，总共需要多少个引物。扩增第n次时，又需要多少个引物。分析这种题型可以借助于DNA的半保留复制模型，可知扩增n次，只有最初的DNA的两条模板链不需要引物，其他DNA链均需要引物，所以扩增n次，共需要引物2nx2-2个，即（2n-1）对引物。而探针个数的问题，又不能简单的类比引物个数的问题，如例3。

利用PCR技术获取和扩增目的基因（PCR技术的条件）条件参与组分在DNA复制中的作用体内PCR模板DNA的两条母链提供DNA复制的模板酶解旋酶打开DNA双链DNA聚合酶催化合成DNA子链场所细胞内液（核液）为DNA的合成提供场所、维持pH等微量的含目的基因的DNA90