分子生物学课-14章 RNA的生物合成课件.ppt

分子生物学课-14章核心酶与DNA双链的作用比较松散，结合半寿期约1hr。核心酶不区分启动子和其他序列。σ亚基加入后，全酶与松散结合位点的结合力下降，半寿期1s；但与启动子结合可增强1000倍，半寿期达几个小时。全酶与启动子结合常数基本反映了启动子的强度。σ亚基与核心酶的解离-结合对RNA聚合酶功能的影响分子生物学课-14章2.转录过程1)启动子（promoter）启动子—RNA聚合酶识别、结合、并启动转录的DNA序列。两组序列：①Pribnow框（Pribnowbox）又叫－10区，序列为：TATAAT②Sexfama框（Sexfamabox）又叫－35区，序列为：TTGACA分子生物学课-14章分子生物学课-14章细菌启动子特征：1、起点通常是一个嘌呤；2、起点上游10bp处，有一约6bp的保守区域，称为-10区（也叫PribnowBox），共有序列为：T80A95T45A60A50T96；3、起点上游35bp处，有一约6bp的保守区，称为-35区，共有序列为：T82T84G78A65C54A45；4、90%的启动子中，-10与-35区的距离在16-18bp之间；两个保守区之间的序列并不重要，但距离很关键。分子生物学课-14章分子生物学课-14章σ因子与启动子的结合分子生物学课-14章σ70的2.4区的氨基酸与启动子-10区非模板链特异碱基的结合分子生物学课-14章RNA聚合酶对启动子的识别可能有三种方式:随机扩散随机行走定向取代2)模板的识别分子生物学课-14章全酶-启动子形成闭合二重复合体；闭合复合体转变为开放复合体；整合进最初两个核苷酸，形成一个磷酸二酯键，形成三重复合体；在酶不需要移动时，即可加入9个核苷酸，但在加入核苷酸过程中，随时可能释放RNA；起始成功后，释放出σ亚基。3)转录的起始分子生物学课-14章RNA聚合酶结合在DNA上时，其长度会发生变化尺蠖模型分子生物学课-14章4)转录的延伸分子生物学课-14章转录过程中的模板识别、起始与延伸分子生物学课-14章终止子（terminator）：终止RNA合成反应所需的DNA序列；在转录结束的位点，提供终止信号。RNA合成的终止实际依赖于已转录的RNA序列。终止发生有两种方式。5)转录的终止不依赖于ρ因子的终止子依赖ρ因子的终止分子生物学课-14章不依赖于ρ因子的终止子（intrinsicterminators）合成的RNA尾部的序列特征：(1)二重对称的序列形成发卡结构；在发卡结构的茎基部富含G-C对；发卡结构可减缓或暂停合成；(2)尾部有约6个连续的U；连续的A-U对使杂交链更容易分离。分子生物学课-14章分子生物学课-14章依赖ρ因子的终止Ρ因子：六聚体，每个亚基46kD,也称终止因子；具依赖RNA的ATP酶活性；在E.coli中可结合于自由RNA链，并沿RNA链移动；序列特征：有一富含C而少G的序列终止子序列:分子生物学课-14章ρ先结合于RNA链上；沿RNA链移动；RNA聚合酶在终止子处暂停；ρ因子追上聚合酶并使之解离，并拆分RNA-DNA杂交链。分子生物学课-14章3.原核生物RNA转录后的加工1)mRNA的加工原核生物转录生成的mRNA基本上不经加工即可进行蛋白质的生物合成（翻译）。事实上许多原核生物的mRNA是在转录尚未完成之前就已开始翻译了。也就是说，转录与翻译是偶联在一起的。许多转录生成的RNA需经加工后才能成为有功能的RNA分子。加工方式:剪接(剪切)、加头加尾、修饰分子生物学课-14章rRNA的加工过程是以核糖体颗粒的形式进行的，即rRNA前体合成后先与蛋白质结合，形成新生核糖体颗粒，而后再经过一系列的加工过程，生成有功能的核糖体。在原核生物中，rRNA包括三种，即16S，23S和5SrRNA。在大肠杆菌中，这三种rRNA的基因形成一个转录单位，其中还包含一个或多个tRNA基因，它们之间由间隔区分开。2)rRNA的加工分子生物学课-14章3)tRNA的加工a.剪切b.在3′端形成-CCAc.tRNA中含有大量修饰成分，还要通过各种不同的修饰酶进行修饰，才能成为成熟的tRNA分子。分子生物学课-14章14.3真核生物RNA的转录过程(1)真核生物的R