3.2 基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序本节聚焦:基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？第三章基因工程

二某DNA片段5’3’3’你知道如何将Bt基因插入下面DNA片段中吗？质粒和Bt基因正向连接5’3’5’3’5’3’5’3’5’二5’3’3’质粒和Bt基因反向连接5’3’5’3’5’3’5’3’5’

二某DNA片段5’3’3’你知道如何将Bt基因插入下面DNA片段中吗？质粒和Bt基因正向连接5’3’5’3’5’ATCG5’3’5’3’GCTA

3.将目的基因导入受体细胞苏云金杆菌与载体拼接普通棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建4.目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序

一、目的基因用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。主要是指编码蛋白质的基因如：Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因Bt抗虫蛋白使棉花抗虫导入人胰岛素基因的大肠杆菌

二、筛选合适的目的基因序列数据库序列比对工具从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选目的基因问题：筛选出来的目的基因，该怎么获得它呢？

细胞工程植物细胞工程动物细胞工程植物组织培养植物体细胞杂交动物细胞培养动物细胞融合动物细胞核移植应用原理步骤原理步骤原理步骤原理步骤原理步骤

三、利用PCR获取和扩增目的基因提取苏云金杆菌PCRPCR中文名称：聚合酶链式反应PCR原理：DNA半保留复制含Bt基因的DNABt基因Bt基因Bt基因Bt基因

【回顾】DNA复制的过程参与的组分在DNA复制中的作用打开DNA双链提供DNA复制的模板合成DNA子链的原料催化合成DNA子链体内DNA复制所需的基本条件解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶

【回顾】DNA复制的过程参与的组分在DNA复制中的作用打开DNA双链提供DNA复制的模板合成DNA子链的原料催化合成DNA子链体内DNA复制所需的基本条件解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶

5PCR扩增过程：

三、利用PCR获取和扩增目的基因（阅读课本P77）1操作环境：2基本条件：体外缓冲液（PCR扩增仪/PCR仪）①模板：②原料：③酶：④2种引物：DNA母链4种脱氧核苷酸耐高温的DNA聚合酶缓冲液中添加Mg2+引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸

PCR过程905072℃延伸905072℃变性905072℃复性

905072℃变性变性：温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链5`3`GGTCGCTA3`5`CCAGCGAT

905072℃复性5`3`3`5`5`5`3`3`引物作用：使耐高温的DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。复性：两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。GGTCGCTACCAGCGATCCAGGCTA两种引物能碱基互补配对吗？

905072℃延伸5`3`3`5`3`5`5`3`引物作用：使DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。请同学们画出第2,3次循环至少要循环次，可以获取目的基因3延伸：耐高温的DNA聚合酶将4种脱氧核苷酸连接到引物的3`端

5’3’3’5’3’5’5’3’5’3’引物13’5’引物25’3’3’5’引物25’3’引物15’3’引物13’5’引物23’5’引物25’3’引物1目的基因3’5’3’5’5’3’引物15’3’引物13’5’引物23’