发酵菌种的制备.ppt

实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选采样（造纸厂）→80℃30min处理文献:产生菌为中性牙孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌、放线菌及霉菌0.0075%曲利本蓝＋1%CMC（羧甲基纤维素），pH10.5培养3～4d，选择有凹陷圈的菌落从285个土样中获得62株26株为组成型36株为诱导型↓1.4工业微生物菌种的分离第23页，共70页，星期日，2025年，2月5日实例：醛肟水解酶的筛选--Journalofbiotechnology94(2002),65-72培养基中含0.05%ofZ-PAOx每隔2~3d移去一半培养物，补充新鲜培养基不断分析样品，2-3个月后Z-PAOx降低后，稀释分离菌落1.4工业微生物菌种的分离第24页，共70页，星期日，2025年，2月5日五、目的微生物富集方法的研究进展分子生物学的实验手段，在微生物鉴别及特定目标产物的筛选方面发挥了着越来越重要的作用。如:16SRNA同源性分析，基因序列分析及DNA/DNA杂交技术等目前土壤中能够培养的微生物不到总数的1%，微生物的多样性及资源的开发仍然是今后若干年的研究重点。陈文新（科学院院士），2002Incontrasttothistraditionalapproach,modernmolecularbiologytechniquesallowforDNAlibraryexpressionscreening,whichalsoenablesaccesstoenzymesof`nonculturableorganisms.Bythisstrategy,forinstance,thecompanyDiversa(SanDiego,CA,USA)identised120uniqueesterases/lipasesfromonly16%ofthetotalDNAobtainedfromanalkalinesoilsample.FEMSMicrobiologyReviews26(2002)73～811.4工业微生物菌种的分离第25页，共70页，星期日，2025年，2月5日目的提高生产能力提高产品质量开发新产品解决生产实际问题防止菌种退化1.5发酵高产菌种的选育第26页，共70页，星期日，2025年，2月5日方法基因突变：自然选育、诱变育种基因重组：杂交、原生质体融合、基因工程基因的直接进化：点突变、易位PCR、同序法DNAShuffling等1.5发酵高产菌种的选育第27页，共70页，星期日，2025年，2月5日自然状态下，碱基对发生自然突变的机率为10-8～10-9。自然突变有两种情况：一种是我们生产上所不希望看到的，表现为菌株的衰退和生产质量的下降，这种突变成为负突变。另一种是我们生产上希望看到的，对生产有利，这种突变成为正突变。一、自然选育1.5发酵高产菌种的选育第28页，共70页，星期日，2025年，2月5日自然选育在工业生产上的意义自然选育虽然突变率很低，但却是工厂保证稳产高产的重要措施。回复突变：高产菌株在传代的过程中，由于自然突变导致高产性状的丢失，生产性能下降，这种情况我们称为回复突变问题：高产菌株是正突变高，还是负突变高？1.5发酵高产菌种的选育第29页，共70页，星期日，2025年，2月5日自然选育操作步骤：一般习惯上将自然选育称为菌种的分离纯化。单细胞(孢子)悬液的制备平板分离挑选单菌落发酵试验1.5发酵高产菌种的选育注意形态的观察选择性培养法随机分离法平板划线法平板稀释法第30页，共70页，星期日，2025年，2月5日二、诱变育种用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变进行的筛选，称为诱变育种。诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质称为诱变剂（P103）诱变剂物理：紫外，快中子，射线，激光化学：硫酸二乙酯（DES），亚硝基胍（NTG）生物：噬菌体，转座子1.5发酵高产菌种的选育第31页，共70页，星期日，2025年，2月5日（二）、诱变剂处理过程中几个有关的问题化学诱变剂使用过程的安全性诱变剂量的选择诱变剂的选择出发菌株的选择（一）、诱变育种的原理诱变育种的理论基础是基因突变，突变主要包括染色体畸变和基因突变两大类。压硝酸：0.07MNa2HPO4亚硝基胍：1MNaOH二、诱变育种第32页，共70页，星期日，2025年