生物化学：第十章 核酸的生物合成.ppt

原核生物DNA聚合酶－真核DNA聚合酶聚合酶DNA连接酶(DNAligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。6、DNA连接酶功能连接复制过程形成的DNA片段,形成一个3′,5′-磷酸二酯键连接酶ATGCCGPPOHAPTATGCCGPAPTP连接酶DNA连接酶ATP（NAD+）ADP+Pi（NMN++AMP）HO5’3’5’3’3’5’5’3’DNA连接酶的连接作用连接酶连接切口Mg2+连接酶ATP或NAD＋AMP+PPi或NMN+AMPATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPPOHTGGATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPTGGP缺口33555533模板链模板链DNA连接酶催化的条件是：①需一段DNA片段具有3-OH，而另一段DNA片段具有5-Pi基；②未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链是完整的；③需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由ATP供能。DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。是基因工程的重要工具酶之一。DNA连接酶的作用本节小结解旋酶：拓扑异构酶：单链DNA结合蛋白：引物酶：DNA聚合酶：DNA连接酶：使DNA双链局部解开成为两条单链。消除正超螺旋，引入负超螺旋。结合单链DNA，保护单链DNA。合成一段RNA引物，提供自由的3′-OH。向子代链的3′-OH端添加核苷酸。将两段相邻的DNA链连接成一条链。（三）原核生物DNA复制DNA+n1dATPn2dGTPn3dCTPn4dTTPDNA+(n1+n2+n3+n4)PPiＤＮＡ聚合酶Mg2+以四种dNTP为底物在DNA模板指令下，按碱基配对的原则，由DNA聚合酶催化，向DNA的3′－OH端添加核苷酸，以5′→3′的方向合成与模板互补的新链。1、复制的起始原核生物：特定位点开始，特定位点终止，只有一个复制子。（基因组能独立进行复制的单位）。真核生物：多个位点起始，多复制子。大肠杆菌复制起始点：oriC（original）终止点：ter（terminate）一些特殊的Pr可以识别并结合到复制起点，随即使DNA双螺旋局部解链，形成复制眼，在其两端的DNA的两股链呈丫字状，称为复制叉。分别向两侧进行复制，通常复制叉双向等速前进，迅速生长的细菌，第一轮复制未完成就启动第二次复制。DNA复制的起始阶段，由下列两步构成。1．解旋解链，形成复制叉：由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA的超螺旋及双螺旋结构解开，碱基间氢键断裂，形成两条单链DNA。单链DNA结合蛋白（SSB）四聚体结合在两条单链DNA上，形成复制叉。2．引发体组装和引物合成：由解螺旋酶(DnaB蛋白)、DnaC蛋白、引物酶(DnaG蛋白)和DNA复制起始区域形成引发体；在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，从而获得3端自由羟基（3-OH）。535dATPdGTPdTTPdCTPdTTPdGTPdATPdCTPOH33DNA-polDNA复制的延长过程2、DNA链的合成与延伸领头链的合成过程随从链的合成过程DNA聚合酶ⅢRNA引物领头链的合成是连续的，而随从链的合成是不连续的，为什么？复制过程简图解螺旋酶3′5′5′3′3′5′DNA拓扑异构酶ⅡDNA聚合酶Ⅲ引发体连接酶DNA复制系统SSPDNA聚合酶I原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。E.colioriter8232oriterSV405003、复制的终止在复制过程中形成的RNA引物，需由RNA酶来水解去除；RNA引物水解后遗留的缺口，由DNA聚合酶Ⅰ（原核生物）或DNA聚合酶?（真核生物）催化延长缺口处的DNA，直到剩下最后一个磷酸酯键的缺口。（1）去除引物，填补缺口：在DNA连接酶的催化下，生成最后一个磷酸酯键，将冈崎片段连接起来，形成完整的DNA长链。（2）连接冈崎片段5?5?5?RNA酶OHP5?DNA-p