蛋白质双向电泳及质谱技术.pptVIP

银染色50%甲醇25%乙酸4hddH2O洗3次30min/次0.004%DTT溶液30min0.1%AgNO330minddH2O30sec3%Na2CO30.0185%甲醛2.3M柠檬酸5%乙酸25%甲醇第30页，共61页，星期日，2025年，2月5日负染主要包括金属盐染料、锌－咪唑染料等的使用能专门提高PAGE胶上蛋白质的回收率速度快（5~15min）且能保持蛋白质的生物活性不能用于膜上染色适用于蛋白质显色、完整蛋白质的胶上被动提取以及质谱分析胶体扩散染料主要包括印度墨水染料、胶体金属染料等高灵敏度检出电转印至硝酸纤维素和PVDF膜上的蛋白质灵敏度与PAGE胶内的银染类似不用于胶内染色染色方法第31页，共61页，星期日，2025年，2月5日有机荧光团染料包括共价结合和非共价结合的荧光团染料两类，后者最为常用，其典型代表是已经商品化的SYPRORed、Orange、Ruby等荧光染料可对SDS胶内蛋白质进行一步染色，约30~60min完成灵敏度为2~10ng其线性范围为3个数量级在Tris/甘氨酸转印缓冲液中染色后，蛋白质可被转印至膜上并进行免疫染色或Edman测序来鉴定蛋白质金属螯合染料与现代蛋白质组学研究相兼容的专门与常用微量化学表征过程兼容不包含戊二醛、甲醛或Twee