生物化学与分子生物学酶 (2).pptVIP

5．酶的转换数当酶被底物完全饱和时（Vmax），单位时间内每个酶分子（或活性中心）催化底物转变成产物的分子数称为酶的转换数（turnovernumber），单位是s-1。酶的转换数可用来表示酶的催化效率。第63页，共112页，星期日，2025年，2月5日1.双倒数作图法(doublereciprocalplot)，又称为林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法Vmax[S]Km+[S]V=（林－贝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]两边同取倒数（三）Ｋm值与Ｖmax常通过林-贝氏作图法求取-1/Km1/Vmax1/[S]1/V第64页，共112页，星期日，2025年，2月5日2.Hanes作图法在林－贝氏方程基础上，两边同乘[S][S]/V=Km/Vmax+[S]/Vmax[S][S]/V-KmKm/Vm1/Vmax第65页，共112页，星期日，2025年，2月5日二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化呈正比关系。第66页，共112页，星期日，2025年，2月5日当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。关系式为：V=k3[E]0V[E]当[S][E]时，Vmax=k3[E]酶浓度对反应速率的影响第67页，共112页，星期日，2025年，2月5日三、温度对酶促反应速率的影响具有双重性温度对酶促反应速率具有双重影响。酶促反应速率最快时反应体系的温度称为酶促反应的最适温度(optimumtemperature)。第68页，共112页，星期日，2025年，2月5日温度对酶活性的影响第69页，共112页，星期日，2025年，2月5日酶的最适温度不是酶的特征性常数，它与反应进行的时间有关。酶的活性虽然随温度的下降而降低，但低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶又恢复其活性。第70页，共112页，星期日，2025年，2月5日四、pH通过改变酶和底物分子解离状态影响酶促反应速率酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适pH(optimumpH)。pH对某些酶活性的影响第71页，共112页，星期日，2025年，2月5日最适pH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。第72页，共112页，星期日，2025年，2月5日五、抑制剂可降低酶促反应速率酶的抑制剂(inhibitor)酶的抑制区别于酶的变性：抑制剂对酶有一定选择性引起变性的因素对酶没有选择性凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称为酶的抑制剂。第73页，共112页，星期日，2025年，2月5日抑制作用的类型不可逆性抑制(irreversibleinhibition)可逆性抑制(reversibleinhibition)竞争性抑制(competitiveinhibition)非竞争性抑制(non-competitiveinhibition)反竞争性抑制(uncompetitiveinhibition)根据抑制剂和酶结合的紧密程度不同，酶的抑制作用分为：第74页，共112页，星期日，2025年，2月5日有机磷化合物??羟基酶解毒------解磷定(PAM)重金属离子及砷化合物??巯基酶解毒------二巯基丙醇(BAL)概念举例抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活。此类抑制剂不能用透析、超滤等方法予以去除。（一）不可逆性抑制剂与酶共价结合第75页，共112页，星期日，2025年，2月5日*有机磷化合物如：敌百虫、敌敌畏、乐果和马拉硫磷等有机磷化合物羟基酶失活的酶酸*胆碱酯酶*解毒剂如：解磷定（碘化醛肟甲基吡啶，PAM）阿托品第76页，共112页，星期日，2025年，2月5日*低浓度重金属离子和砷化合物如：路易斯气*路易斯气与糜烂性毒剂路易士气巯基酶失活的酶酸失活的酶BAL巯基酶BAL与砷剂结合物第77页，共112页，星期日，2025年，2月5日（二）可逆性抑制剂与酶非共价结合竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制类型概念抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低