阿司匹林载药囊泡调节巨噬细胞表型重塑治疗牙周炎的作用研究.pdfVIP

摘要

摘要

牙周炎（Periodontitis，PD）是口腔常见的一种慢性炎症性疾病，以往研究表明

牙周炎局部免疫微环境中巨噬细胞的促炎型极化增强进而导致牙槽骨吸收。目前的

治疗方法尚不能修复炎症引起的牙周组织缺损，因此，改善牙周炎症环境，从根本

上治疗牙周炎，成为了亟待解决的问题。阿司匹林（Aspirin,ASP）作为一种非甾类

抗炎药物对炎症性疾病的治疗效果出众，低剂量ASP还能促进成骨，但是长期使用

ASP会引起胃肠道出血、肺损伤、肝损伤、肾损伤等副作用。而近年来研究显示间

充质干细胞的细胞外囊泡（ExtracellularVesicles，EVs）具有促进组织再生与修复的

能力，并且EVs还是一种优良的药物载体，具有强稳定性，低毒性、低免疫原性、

能穿过多种生物屏障，具有靶向性等诸多优点。因此，本研究将ASP通过温和超声

的方法包载到EVs中构建ASP载药囊泡，旨在研究一种新的ASP给药方法，从而调

节牙周炎免疫微环境，以促进牙槽骨修复，并探讨ASP对巨噬细胞的作用机制。

本研究首先从牙周膜干细胞（Periodontalligamentstemcells，PDLSCs）中分离

EVs，并通过低渗裂解、温和超声的方法包载ASP，构成ASP载药囊泡EVs-ASP。

通过扫描电镜（Scanningelectronmicroscope，SEM）、WesternBlot（WB）、动态光

散射（Dynamiclightscattering，DLS）、高效液相色谱（HighPerformanceLiquid

Chromatography，HPLC）等一系列方法对EVs-ASP进行鉴定。结果发现EVs-ASP

较EVs表面更光滑，粒径有所增加，但表面标记物表达没有差别，HLPC检测结果

显示ASP被成功地包载到了囊泡中。

随后，本研究评估了EVs-ASP在小鼠牙周炎模型中的治疗效果，发现EVs-ASP

能够调节牙周局部免疫微环境，通过WB和酶联免疫吸附测定（EnzymeLinked

ImmunosorbentAssay，ELISA）检测小鼠牙龈组织的炎性因子，发现EVs-ASP降低

促炎因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）

的表达，促进抑炎因子白细胞介素-10（IL-10）和精氨酸酶（ARG-1）的表达。

MicroCT扫描和3D重建小鼠的颌骨，发现经EVs-ASP治疗后的牙周炎小鼠的颌骨

的骨吸收明显减少，经过测量和统计发现EVs-ASP效果优于单纯的ASP和EVs。

体外实验探讨了EVs-ASP对LPS诱导的促炎型巨噬细胞的作用，经过免疫荧光

染色及统计发现，巨噬细胞吞噬EVs和EVs-ASP的能力没有明显差异。流式细胞术、

实时定量聚合酶链式反应（QuantitativeReal-timePolymeraseChainReaction，qRT-

I

西北大学硕士学位论文

PCR）、WB和ELISA检测发现EVs-ASP降低了促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表

达，促进了抑炎因子IL-10和ARG-1的表达，表明EVs-ASP通过调控巨噬细胞表型

重塑抑制炎症。

最后，进一步研究了EVs-ASP调节牙周炎巨噬细胞表型重塑的潜在机制，通过

Seahorse检测了巨噬细胞的耗氧率（OxygenComsumptionRate，OCR）和细胞外酸

化率（ExtracelluarAcidificationRate，ECAR）水平，对代谢产物乳酸和ATP进行检

测，qRT-PCR检测代谢酶基因的表达，发现经过EVs-ASP的处理，LPS诱导的巨噬

细胞的代谢方式由糖酵解转化为氧化磷酸化（Oxidativephosphorylation,OXPHOS）。

综上所述，EVs-ASP通过增强巨噬细胞中的OXPHOS促进其向抑炎型巨噬细胞

极化，进