蛋白质分离纯化和表征.pptVIP

蛋白质分离纯化和表征第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日第7章蛋白质的分离、纯化和表征

p290一、蛋白质的酸碱性质二、蛋白质分子的大小与形状三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀四、蛋白质分离纯化的一般原则五、蛋白质的分离纯化方法六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定七、蛋白质性质小结（补充）第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日一、蛋白质的酸碱性质蛋白质分子由氨基酸组成，在蛋白质分子中保存着游离的α-氨基和α-羧基及侧链上的各种功能团，所以其物理化学性质有些与氨基酸相同。蛋白质也是一类两性电解质，能和酸或碱发生作用。在蛋白质分子中，可解离基团主要来自侧链上的功能团，这些基团能解离为带电基团，从而使蛋白质带电荷。第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日在酸性情况下，蛋白质中的各碱性基团接受质子，使蛋白质带正电荷；在碱性情况下，蛋白质中的各酸性基团解离出质子，使蛋白质带负电荷。在某一pH值时，白质所带的正电荷与负电荷恰好相等，即净电荷为零，此时溶液的pH值就是蛋白质的等电点。每种蛋白质都有它特有的等电点，这也是鉴别蛋白质的指标之一。等电点和蛋白质分子中所含氨基酸的种类有关中性碱性酸性。第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸含量与等电点的关系蛋白质酸性氨基酸每摩尔残基数碱性氨基酸每摩尔残基数碱性/酸性等电点37胃蛋白酶60.21.0血清蛋白血红蛋白核糖核酸酶82991.24.753881.76.77202.99.5第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日二、蛋白质分子的大小与形状(一)根据化学组成测定最低相对分子质量(二)渗透压法测定相对分子质量（三)蛋白质的扩散和扩散系数(四)沉降分析法测定相对分子质量(五)凝胶过滤法测定相对分子质量(六)SDS酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量(七)蛋白质分子的形状第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日(一)根据化学组成

测定最低相对分子质量用化学分析方法测定出蛋白质某一微量元素（如铁）的含量，并假设蛋白质分子中只有一个铁原子，则可计算出蛋白质的相对分子质量。例肌红蛋白含铁量为0.335%，其最低相对分子质量可按下式计算:铁的原子量最低相对分子质量=×100铁的百分含量=(55.8/0.335)×100=16700注：真实的Mr(相对分子质量)为最低相对分子质量的n倍(n=1，2，3……)第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日(二)渗透压法测定相对分子质量渗透压:为了制止溶液与纯溶剂之间的净移动所需施加于溶液的压力，它是单位体积内溶质质点数的函数，与溶质的性质和形状无关。优点:所用实验装置简单准确度不亚于其他方法缺点:蛋白质的渗透压受PH影响，只有蛋白质分子处于等电点时，测定的渗透压才不受缓冲液中无机离子的影响。需要纯品。P292图7-1第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的相对分子量可以直接用沉降系数表示。一般把单位离心场里的沉降速度称为沉降系数。沉降系数用s表示。一个s单位：为1×10-13秒,8×10-13秒用8s表示。超速离心机最初是Svedberg于1940年设计制造的。沉降分析法测定相对分子质量第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日（1）沉降速度法把蛋白质样品放在离心机中，在离心力的作用下，蛋白质分子沿旋转中心向四周移动，并产生沉降界面，界面的移动速度代表蛋白质的移动速度。在界面处由于浓度差造成折射率不同，可借助适当的光学系统，分析计算蛋白质的分子量。第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日利用沉降平衡