第三章高效液相色谱法B.ppt

1、软质凝胶种类：如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构特点：?微孔能吸入大量的溶剂，并能溶涨到它干体的许多倍?适用于水溶性溶剂作流动相，一般用于小分子质量物质的分析，不适宜在高效液相色谱中。第30页，共47页，星期日，2025年，2月5日2、半硬质凝胶（有机凝胶）种类：如苯乙烯二乙烯苯交联共聚物凝胶，特点：能耐较高压力，适用于有机溶剂作流动相，有一定可压缩性，可填得紧密，柱效较高。缺点：在有机溶剂中有轻度膨胀。第31页，共47页，星期日，2025年，2月5日3、硬质凝胶（无机凝胶）是具有一定孔径范围的多孔性凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃珠等凝胶化学惰性、稳定性及机械强度均好，耐高温，使用寿命长，但装柱时易碎，不易装紧，柱效较低。第32页，共47页，星期日，2025年，2月5日（三）流动相选择依据（从样品的溶解性考虑）流动相应与凝胶本身有相似性黏度低与样品的折光率相差大能润湿凝胶，防止吸附作用常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷（凝胶渗透色谱）；水（凝胶过滤色谱）等。第33页，共47页，星期日，2025年，2月5日第1页，共47页，星期日，2025年，2月5日一、液－液色谱法（或称液－液分配色谱法）分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异(一)固定相载体+固定液（物理或机械涂渍法）缺点：系统内部压力大，易流失，不实用第2页，共47页，星期日，2025年，2月5日常用的几类载体：（1）表面多孔型载体（薄壳型微珠载体）由直径为30～40?m的实心玻璃球和厚度约为1～2?m的多孔性外层所组成（2）全多孔型载体：由硅胶、硅藻土等材料制成，直径30～50?m的多孔型颗粒（3）全多孔型微粒载体：由nm级的硅胶微粒堆积而成，又称堆积硅珠。这种载体粒度为5～10?m第3页，共47页，星期日，2025年，2月5日固定液由于液相色谱中，流动相参与选择作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的差异。液相色谱中，只需几种不同极性的固定液即可。如β,β′—氧二丙腈（ODPN），聚乙二醇（PEG），十八烷（ODS）和角鲨烷固定液等。第4页，共47页，星期日，2025年，2月5日(二)流动相要求流动相对固定相的溶解度尽可能小，因此固定液和流动相的性质往往处于两个极端第5页，共47页，星期日，2025年，2月5日?正相色谱——固定液极性流动相极性极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于分离极性组分?反相色谱——固定液极性流动相极性极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离非极性组分第6页，共47页，星期日，2025年，2月5日二、化学键合相色谱法（一）原理?化学键合相：利用化学反应，通过共价键将有机基团键合在载体（硅胶）表面，形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相?分离机制：分配+吸附（以LLC为基础）?特点：不易流失；热稳定性好化学性能好；载样量大适于梯度洗脱第7页，共47页，星期日，2025年，2月5日（二）固定相载体：几乎都用硅胶。一般可分三类：（1）疏水基团如不同链长的烷烃（C8和C18。）和苯基等（2）极性基团如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。（3）离子交换基团如作为阴离子交换基团的胺基，季镀盐；作为阳离子交换基团的磺酸等.第8页，共47页，星期日，2025年，2月5日键合固定相的制备（l）硅氧碳键型（硅酸酯型）（≡Si-O-C）键合相最先用于液相色谱的健合固定相,用醇与硅醇基发生酯化反应。由于这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相第9页，共47页，星期日，2025年，2月5日（2）硅氮型（≡Si-N）键合相将硅胶表面的羟基先转化成卤素（氯化），再与各种有机胺反应，可以得到各种不同极性基因的键合相。可用非极性或强极性的溶剂作为流动相（3）硅碳型（≡Si-C）键合相将硅胶表面氯化后，使Si-Cl键转化为Si-C键。在这类固定相中，有机基团直接键合在硅胶表面上。缺点：该反应不方便；当使用水溶液时，必须限制PH在4～8范围内.第10页，共47页，星期日，2025年，2月5日（4）硅烷化（≡Si—