第九次实验方法比较试验.pptVIP

第1页，共16页，星期日，2025年，2月5日方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法做对比，以评价候选方法的准确度。它同时可检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。第2页，共16页，星期日，2025年，2月5日教学目的与要求1.掌握方法比较试验的原理和评价。2.掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法测血糖的测定原理。3.熟悉己糖激酶法和氧化酶法测定血清血糖的操作过程。第3页，共16页，星期日，2025年，2月5日一、试剂与材料1.己糖激酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合）。2.氧化酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合）。3.半自动生化分析仪。4.实验血清。第4页，共16页，星期日，2025年，2月5日三、血糖的测定（己糖激酶法已讲）（一）实验原理Trinder反应:GOD葡萄糖酸＋2H2O2氧化酶法葡萄糖＋2H2O＋O2H2O2＋4-AAP＋酚POD苯醌亚胺＋2H2O＋HCl第5页，共16页，星期日，2025年，2月5日2.混匀，37℃水浴7分钟，波长500nm比色。（二）操作方法工作液1ml蒸馏水10ul葡萄糖标准10ul血清10ul1.空白管标准管测定管工作液1ml混合混合第6页，共16页，星期日，2025年，2月5日3.结果计算测定管吸光度GLU（mmol/L)＝×5.56

标准管吸光度GLU（mmol/L)＝×5.56

GLU（mmol/L)＝×5.56

GLU（mmol/L)＝×5.56

第7页，共16页，星期日，2025年，2月5日4.注意事项1.新配制的葡萄糖标准液须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用.2.尿酸会干扰过氧化物酶反应，使结果偏低。3.还原性物质可竞争H2O2,使结果偏低。4.严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。第8页，共16页，星期日，2025年，2月5日四、方法比较以葡萄糖已糖激酶法作为参比方法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进行比较。第9页，共16页，星期日，2025年，2月5日1.收集标本每天收集高、中、低不同浓度标本8份，5天共40份。2.测定将标本编号，分别用两种方法先从1-8顺序测定，再从8-1顺序测定，记录测定结果。重复5天。第10页，共16页，星期日，2025年，2月5日以对比方法的结果为横坐标被评价方法的结果为纵坐标绘制散点图。3.绘制散点图YX??????????第11页，共16页，星期日，2025年，2月5日4.检查散点图有无明显离群点（1）分别计算每对结果差值，如：X1-Y1、X2-Y2.....（2）计算所有差值的平均差值。（3）离群判断以4倍平均差值作判断限。某对差值超出4倍平均差值则视为离群点，剔除，若有两个离群点，则另做标本补充8分结果。第12页，共16页，星期日，2025年，2月5日