植物组织培养基本技术.ppt

第1页，共35页，星期日，2025年，2月5日第一节培养基及其配制一、培养基成分培养基：供植物材料生长的人工配制的基质。（一）水分：母液及培养基配制时，要用蒸馏水，但大规模生产时，可用自来水代替。（二）无机元素：根据植物需要量的多少，可分为：大量元素和微量元素。第2页，共35页，星期日，2025年，2月5日1.大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素，包括：N、P、K、Ca、Mg、S等。N：在制备培养基时以NO3-N和NH4-N两种形式供应。常用含N物质有KNO3、NH4NO3、(NH4)2SO4P：常用的物质有KH2P04或NaH2P04等。K：常用的物质有KCI、KN03、KH2P04Ca、Mg、S：MgSO4·7H20、CaCl2·2H2O第3页，共35页，星期日，2025年，2月5日2、微量元素：指小于0.5mmol／L的元素，包括Fe，B，Mn，Cu，Zn，Mo，Co等。Fe：常用FeSO4·7H20，因其在pH值5.2以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀，通常FeSO4·7H20和Na2—EDTA结合成络合物使用。B：H3BO3Mn，Cu，Zn：常用其硫酸盐；Mo：Na2MoO4Co:CoCl2第4页，共35页，星期日，2025年，2月5日（三）有机营养物质：培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基（basicmedium)。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类：第5页，共35页，星期日，2025年，2月5日1、碳水化合物——碳源：可作为碳源的有蔗糖，葡萄糖和果糖最常用的碳源是蔗糖，蔗糖使用浓度在2%—5%，常用3%（30g/L），即配制一升培养基称取30g蔗糖，有时可用2.5%。第6页，共35页，星期日，2025年，2月5日2.维生素：常用维生素有VB1(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、VB3(又称Vpp，烟酸或尼克酸)、VB5（泛酸）、Vc（抗坏血酸），有时还使用VH（生物素）、叶酸、VB12等。一般用量为0.1—1.0mg／L。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长，Vpp与植物代谢和胚的发育有一定关系。Vc有防止组织变褐的作用。第7页，共35页，星期日，2025年，2月5日3.氨基酸：培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，用量在10-1000mg／L之间。4.肌醇：使用浓度一般为50~l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。第8页，共35页，星期日，2025年，2月5日5.天然有机附加物：如椰汁、香蕉汁、马铃薯汁、酵母提取液等。（四）植物生长调节剂：1、生长素类：（1）组培中的作用：①促进细胞伸长；②促进生根；③诱导愈伤组织的形成；④2,4-D会诱导某些植物不定胚的形成。第9页，共35页，星期日，2025年，2月5日（2）常用的生长素：吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）（3）常用浓度：0.1~5.0mg/L（4）需注意的问题：①IAA稳定性差——过滤灭菌，避光保存；②生长素与细胞分裂素（CTK）配合使用：IAA/CTK比值高，促进根的分化；IAA/CTK比值低，促进芽的分化；IAA/CTK比值始终，形成愈伤组织，不分化③2,4-D可有效诱导愈伤组织的形成，但对芽的形成具有抑制作用，且使用浓度范围较窄，稍过量对植物组织有毒害作用；④诱导分化、增殖和生根阶段一般选用IBA和NAA第10页，共35页，星期日，2025年，2月5日2.细胞分裂素（CTK）：（1）作用：①促进细胞分裂；②诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长；③抑制顶端优势，延缓离体组织衰老；④对根的生长一般起抑制作用（2）常用的细胞分裂素：6-苄基腺嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、玉米素（ZT）等。（3）使用浓度：一般0.1~10.0mg/L第11页，共35页，星期日，2025年，2月5日3.其他生长调节剂：（1）GA：赤霉素①作用：a.促进幼苗茎的伸长和不定胚发育为小植株b.与生长素协同作用，对形成层的分化有影响：IAA/GA比值高时，有利于木质部分化IAA/GA比值低时，有利于韧皮部分化c.打破休眠d.抑制器官和胚状体的形成，但二者形成后，又可促进其生长②