分子生物学常用技术课件.pptxVIP

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2025-08-05 发布于未知
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分子生物学常用技术课件.pptx

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分子生物學常用技術

ThePopularTechnologyin

MolecularBiology;第一節;一、核酸分子印跡與雜交技術;(heteroduplex);7/29/2025;用一種標記核苷酸代替原料dNTPs中對應的非標記核苷酸，使標記核苷酸摻入到新合成DNA鏈中。;Dig-DNA探針雜交化學發光信號檢測原理;Biotin-DNA探針雜交化學發光信號檢測原理;（一）Southern印跡雜交;Southern印跡雜交的基本步驟:;限制性內切酶消化;（二）Northern印跡雜交;Northern與Southernblotting的異同點;;North-South雜交原理和操作流程(Biotin標記);1.曝光：用濾紙吸去雜交膜上多餘底物，作好標記，

保鮮膜包裹，放在暗夾裏，放上X光片，曝光1-5

分鐘；;（三）其他核酸雜交方法;二、蛋白質印跡技術(Westernblotting);7/29/2025;;缺點：;三種印跡技術的比較;第二節;KaryB.Mullis（1944－）;TheNobelPrizeinChemistry1993;PCR體系基本組成成分;;;變性

93~95?C左右;二、PCR技術的主要特點;7/29/2025;2.利用特異性引物以cDNA或基因組DNA為範本獲得已知目的基因片段。;;電泳;DNA自動測序結果;TheNobelPrizeinChemistry1980;彌補了PCR技術和原位雜交技術的不足，是將目的基因的擴增與定位相結合的一種最佳方法。;即時螢光定量PCR;第三節;是指將外源基因整合到動物或植物細胞的基因組中，並使外源基因在動物細胞或植物細胞中穩定地遺傳和表達的技術。;1982年哈佛R.D.Palmiter

“製造”出“超級小鼠”;2.乳腺生物反應器的誕生;是用顯微操作、電融合等方法，將供體動物體細胞的胞核，全部導入另一動物個體的去核卵細胞中，然後將其置入受體動物子宮，使之發育成為動物個體的技術。;1997年2月27日Nature雜誌報導：科學家維爾穆特(Wilmut)和坎貝爾(Campbell)，利用克隆技術，培育出一只小母羊“多利”。

“多利”誕生標誌著生物技術新時代來臨。

克隆技術被《科學》評為1997年世界十大科技進步之首。;1997年6月維爾穆特(Wilmut)報導：用基因改造過的胎兒成纖維細胞為核供體，獲得了表達人凝血因數IX的轉基因克隆綿羊“波莉”。;動物;－－又稱基因打靶(genetargeting);基本過程包括：;四、基因轉移和基因剔除在醫學中的應用;第四節;DNA晶片(DNAchip)、DNA陣列(DNAarray)或cDNA晶片(cDNAchip);7/29/2025;*Cy3為紅色,標記測試組；Cy5為綠色,標記(正常)對照組。;蛋白質晶片概念：是將大量特定的蛋白分子作為探針，高度密集排列並固定在固相支持物表面而構成的集成分析系統。;第五節;第六節