备考2026年生物高考 基因工程的基本工具与操作程序 专项练习.docVIP

高考生物备考

基因工程的基本工具与操作程序

【课标要求】1.概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的；2.阐明重组DNA技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具；3.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。

考点1基因工程的基本工具

考点透析

知识1基因工程概述

基因工程又叫作重组DNA技术。

项目

内容

主要技术

转基因技术

操作环境

操作水平

理论依据

基因重组

供体

提供

受体

复制或表达目的基因

基本过程

切割→改造和拼接→导入→表达

优点

克服的障碍，

定向改造生物的

知识2基因工程的基本工具

1.限制性内切核酸酶(限制酶)

图中可见，限制酶在识别序列中心轴线两侧切开产生的是，在识别序列中心轴线处切开产生的是。

2.DNA连接酶

(1)作用：在两个核苷酸之间形成以连接两个DNA片段。

(2)主要类型：①E.coliDNA连接酶：从中分离；②：从T4噬菌体中分离。两者都能连接和平末端，但前者连接具有平末端的DNA片段的效率远远低于后者。

归纳总结

与DNA有关的酶

酶

作用

作用相关“键”

限制酶

切割DNA片段，产生两个(具有相同黏性末端或平末端)DNA片段

破坏磷酸二酯键

DNA

连接酶

催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而连接起来

形成磷酸二酯键

解旋酶

将双链DNA分子局部解旋为单链(ATP水解供能)

破坏氢键(氢键非化学键)

DNA

聚合酶

把游离的脱氧核苷酸连接到引物或者已有的DNA单链的3′端上

形成磷酸二酯键

DNA

(水解)酶

将DNA水解为脱氧核苷酸

破坏磷酸二酯键

逆转录酶

以RNA为模板合成cDNA

形成磷酸二酯键

3.载体

(1)作用：将基因送入细胞。

(2)种类：质粒、、动植物病毒等。

(3)重要的载体之一——质粒

①质粒的本质：是一种裸露的、结构简单，独立于真核细胞的细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的。

②质粒适于作基因载体的特点(载体须具备的条件)

特点(条件)

作用

有一个至多个

供外源DNA片段插入其中

能在细胞中进行，或整合到受体DNA上，随受体细胞DNA同步复制

便于目的DNA在受体细胞中稳定存在

带有(常是人工改造后具有)，一般为抗生素抗性基因或荧光基因等

便于重组DNA分子的筛选(鉴定目的基因是否导入成功)



深度指津

最常见的标记基因——抗生素抗性基因

目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，原理如下图所示(以氨苄青霉素抗性基因为例)：

1.判断下列说法的正误：

(1)目前使用的限制酶都是从原核生物中得到的。()

(2)质粒是存在于细菌细胞中的一种细胞器。()

(3)重组DNA技术所用的工具酶包括限制酶、DNA连接酶和载体。()

(4)不同的限制酶切割DNA，可能得到相同的黏性末端。()

(5)用DNA连接酶可连接两种来源不同的DNA。()

(6)用同一种限制酶切割目的基因和质粒，是为了获得相同的黏性末端，以便连接。()

(7)限制酶的识别序列都由6个核苷酸组成。()

2.限制酶在原核生物中的作用是什么？它会不会切割自己的DNA分子？请解释。

典题说法

考向1基因工程中工具酶的选择和利用

(2023·重庆卷)某小组通过PCR(假设引物长度为8个碱基，短于实际长度)获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切(下图)，再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是()

A．其中一个引物序列为5′－TGCGCAGT－3′

B．步骤①所用的酶是SpeⅠ和CfoⅠ

C．用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2个片段

D．酶切片段和载体连接时，可使用E.coliDNA连接酶或T4DNA连接酶

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶

BamHⅠ

HindⅢ

EcoRⅠ

SmaⅠ

识别序

列及切

割