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第30页，共64页，星期日，2025年，2月5日从表1的结果可以看出：载体经含血清的培养基浸泡后，载体对细胞的吸附力增强，含10%血清的培养基浸泡了2到24小时，细胞的贴壁率效果基本相同，说明载体经10%血清的培养基浸泡了2小时后接种细胞，细胞在5小时后，5%细胞已贴壁于载体。第31页，共64页，星期日，2025年，2月5日2.4.2搅拌速度对昆虫细胞贴壁于载体的影响A组：30rpmB组：50rpmC组：100rpmD组：150rpm利用2.5L篮式生物反应器，将细胞的接种浓度控制在1.40～1.50×105/ml，并分别在4次的接种细胞后，设定搅拌速度为30rpm、50rpm、100rpm、150rpm，分别在接种后的30、60、120、180、240以及300分钟的时候取培养液，计数此时的细胞浓度。第32页，共64页，星期日，2025年，2月5日第33页，共64页，星期日，2025年，2月5日从表2不难看出，昆虫细胞在生物反应器的初期，搅拌速度对细胞的贴壁有一定的影响，搅拌速度越大，越不利于细胞贴壁于载体。当搅拌速度达到150rpm时，接种后300分钟，细胞几乎没有贴壁于载体。第34页，共64页，星期日，2025年，2月5日2.4.3昆虫细胞批式培养和灌流培养的比较细胞的批次培养是指细胞接种后，收获之前，培养液不进行换液，最后一次性收获系统制备的产物罐流培养是指在细胞培养过程中，不断地更换培养液，使培养环境处于一个动态的健康的培养状态。为了比较和验证两种培养方式对昆虫细胞生长的不同影响，特此进行以下试验第35页，共64页，星期日，2025年，2月5日两次的细胞接种浓度均为1.0×105cells/ml。批次培养5天不更换培养液；灌流培养是在接种后12小时开始灌流，灌流速度为0.2V/day，48小时后改变灌流速度为0.5V/day，一直到120小时（5天）。每天取载体进行消化计数细胞，算出此时的细胞浓度，从而比较相同的培养时间不同的培养方式的昆虫细胞生长状况，见图3批次培养方式和灌流培养方式第36页，共64页，星期日，2025年，2月5日第37页，共64页，星期日，2025年，2月5日批次培养过程中的第4天，细胞密度缓慢地达到最大值1.54×106/ml。灌流培养过程中，由于培养液的营养成分不断地更新，细胞很快进入了对数生长期。在培养的第4天，细胞密度达到最大值5.06×106/ml，是批次培养细胞密度最高值的3.3倍。此时灌流速度为0.5V/day，如果灌流培养的第4天继续增大灌流速度，细胞密度有可能还会继续提高。第38页，共64页，星期日，2025年，2月5日2.4.4接种浓度对细胞生长的影响本实验利用灌流培养，分别采用接种浓度为0.5×105cells/ml、1.0×105cells/ml、5.0×105cells/ml，3次培养均在接种后12小时开始灌流培养，灌流速度为0.2V/day，48小时后改变灌流速度为0.5V/day，一直到120小时（5天）并且每天取载体进行消化计数细胞，算出此时的细胞浓度，比较不同的细胞接种密度，在培养过程中的相同培养时间点上昆虫细胞生长的状况，见图4。第39页，共64页，星期日，2025年，2月5日第40页，共64页，星期日，2025年，2月5日在图4中，可以很清楚地看出，细胞接种量越低，细胞生长的延迟期越长，细胞很长时间才能达到密度最高；细胞接种越大，细胞就会在短时间内达到最高密度，但由于培养过程中培养液营养成分的限制，细胞达到最大密度后，细胞密度会很快降低；根据培养情况，及时加大灌流培速度，使营养成分的更新速度加快，从而使细胞密度会大大地增大。第41页，共64页，星期日，2025年，2月5日2.4.5CO2对细胞生长的影响动物细胞的生物反应器培养时，一般均采用空气、氧气、氮气和CO2等四种气体为培养系统维持罐内压和供氧，甚至协同地起到调节培养酸碱度的作用第42页，共64页，星期日，2025年，2月5日利用两次篮式生物反应器的批次培养，一次批次培养的接种浓度为1.0×105cells/ml；采用3种气体（空气、氧气和氮气）来维持培养过程中罐内的压力和供氧；另一次批次培养的接种浓度为1.2×105cells/ml，采用4种气体（空气、氧气、氮气和二氧化碳）来维持培养过程罐内的压力和供氧第43页，共64页，星期日，2025年，2月5日第44页，共64页，星期日，2025年，2月5日没有使用CO2气体的批次培养中细胞密度则可以达到1.54×106/ml，而使用了CO2气体的批次