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临床实验室检测和体外诊断系统病原宏基因组学高通量测序性能确认标准立项报告

EnglishTitle:PerformanceVerificationofMetagenomicNext-GenerationSequencingforPathogenDetectioninClinicalLaboratoriesandInVitroDiagnosticSystems

摘要

病原宏基因组学高通量测序（MetagenomicNext-GenerationSequencing,mNGS）作为一种新兴的病原学诊断技术，能够对临床样本中的潜在致病性病原体进行无偏倚性检测，显著提升了疑难和罕见感染性疾病的诊断能力。然而，由于技术流程复杂、专业人才匮乏以及缺乏统一的技术规范，目前国内临床实验室在开展mNGS检测前的方法学建立和性能确认方面面临较大挑战。国家卫生健康委临床检验中心在2020年和2022年组织的两次全国性室间质量评价预研活动中，总体通过率均低于60%，反映出行业质量控制的迫切需求。

本报告系统阐述了“临床实验室mNGS性能确认”国家标准的立项背景、目的意义、适用范围及主要技术内容。该标准由北京协和医院牵头，联合国家卫生健康委临床检验中心、中国食品药品检定研究院共同申请，旨在规范mNGS检测流程的性能确认体系，涵盖湿实验（核酸提取、去宿主、建库）和干实验（数据库构建、生物信息分析、报告解读）全流程，并明确包括背景核酸控制、阳性判断阈值、最低检出限、精密度、抗干扰能力、交叉干扰、稳定性及准确性等关键性能指标的评估要求。

该标准的制定将填补国内mNGS临床检测标准化空白，为医学实验室、体外诊断产品开发商及制造商提供统一的技术依据，推动mNGS技术从科研向临床规范化、规模化应用转型，进一步提升我国感染性疾病的精准诊疗水平。

关键词

-病原宏基因组学；MetagenomicNext-GenerationSequencing(mNGS)

-性能确认；PerformanceVerification

-临床实验室；ClinicalLaboratory

-高通量测序；High-ThroughputSequencing

-标准化；Standardization

-质量控制；QualityControl

-体外诊断；InVitroDiagnostics(IVD)

-感染性疾病；InfectiousDiseases

正文

一、立项背景与目的意义

病原宏基因组学高通量测序（mNGS）技术通过对临床样本中全部核酸进行无偏倚测序，实现对细菌、病毒、真菌、寄生虫等多种病原体的同步检测，尤其适用于传统培养和分子检测方法难以确诊的复杂、罕见或新发病原体感染。随着测序成本下降和生物信息分析工具的进步，mNGS正逐步从科研应用转向临床常规检测。

然而，mNGS技术流程复杂，涵盖湿实验（wetlab）和干实验（drylab）多个环节，涉及样本前处理、核酸提取、建库、测序、生物信息分析和临床报告生成等步骤。目前国内多数临床实验室在人员培训、技术积累和质量体系构建方面尚不成熟，导致检测结果的一致性、准确性和可靠性存在较大差异。国家卫生健康委临床检验中心在2020年和2022年组织的全国mNGS室间质评结果显示，平均通过率不足60%，凸显出行业质量规范的缺失。

北京协和医院作为国内较早开展mNGS临床应用的医疗机构，于2022年1月完成mNGS方法学的建立与性能确认，并在临床实践中成功辅助诊断多例疑难感染病例。其团队总结的经验发表于《中华检验医学杂志》，成为该刊年度阅读量前十的文章之一，显示出行业对标准化方案的迫切需求。

为进一步推动mNGS技术的规范化应用，北京协和医院联合国家卫生健康委临床检验中心、中国食品药品检定研究院，共同发起“临床实验室mNGS性能确认”国家标准立项申请。该标准旨在：

1.明确mN检测流程中各环节的技术要求；

2.建立系统化的性能确认指标体系；

3.为实验室自建项目（LDT）和体外诊断产品（IVD）开发提供技术依据；

4.提升检测结果的可靠性、可比性和临床适用性。

二、范围与主要技术内容

本标准适用于拟开展病原宏基因组学高通量测序检测的医学实验室，在临床检测前进行检测流程建立和方法学性能确认。其技术内容主要包括以下方面：

1.检测流程建立要求

-湿实验部分：明确核酸提取、去宿主处理、文库构建等环节的操作规范、质量控制点和验收标准；

-干实验部分：规定病原数据库的构建与更新要求、生物信息分析流程的标准化、结果解读的临床一致性准则。

2.性能确认指标体系

-背景核酸控制：评估样本中非病原核酸对检测结果的干扰程度；

-阳性判断阈值（Cut-off值）：确立病原