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基于DNA条形码、特异性引物鉴定益母草及其易混淆品

孟祥松1，王雨艨2，王孟虎1，郝婷婷3，孙一帆4，李啸云2，金阳5(1.亳州学院，安徽亳州236800；2.亳州市食品药品检验中心，安徽亳州236800；3.浙江农林大学，杭州310000；4.亳州职业技术学院，安徽亳州236800；5.芜湖市食品药品检验中心，安徽芜湖241000)

摘要：目的利用DNA条形码、特异性引物对益母草、夏至草进行鉴定。方法基于ITS2通用引物对益母草、夏至草进行扩增并测序，构建NJ系统发育树；根据ITS2序列设计益母草、夏至草特异性引物，并对引物的特异性、退火温度、引物量、模板量、循环次数、检测限进行考察；基于特异性引物结合SYBR荧光定量PCR法检测益母草、夏至草的熔解温度(meltingtemperature，Tm)值，并对其检测限进行考察；基于普通PCR及荧光定量PCR分别对收集的样品真伪进行检测。结果基于ITS2构建的NJ树显示益母草、夏至草均独立聚为1支；益母草、夏至草的引物均具有特异性，其最佳退火温度、引物量、模板量、循环次数分别为65.2℃、1.0μL(10mmol·L?1)、80ng、35次循环，普通PCR益母草、夏至草检测限分别达到4.0、40.0ng·μL?1。基于特异性引物结合SYBR荧光定量PCR可知：益母草、夏至草的Tm值分别为85.5~86.0℃、82.0~82.5℃,其检测限均达到1pg·μL?1。结论基于DNA条形码、特异性引物、荧光定量PCR法均能够对益母草、夏至草进行鉴定，基于SYBR荧光定量PCR检测限远小于普通PCR的检测限，为益母草、夏至草微量掺伪鉴定提供依据。

关键词：益母草；夏至草；DNA条形码；特异性引物；SYBR荧光定量PCR

中图分类号：R284.1文献标志码：B文章编号：1007-7693(2025)11-1896-12

DOI:10.13748/ki.issn1007-7693引用本文：孟祥松,王雨艨,王孟虎,等.基于DNA条形码、特异性引物鉴定益母草及其易混淆品[J].中国现代应用药学,

2025,42(11):1896-1907.

IdentificationofLeonurusJaponicusandItsConfoundingProductsBasedonDNABarcodingandSpecificPrimers

MENGXiangsong1,WANGYumeng2,WANGMenghu1,HAOTingting3,SUNYifan4,LIXiaoyun2,JINYang5(1.BozhouUniversity,Bozhou236800,China;2.BozhouInstitutesforFoodandDrugControl,Bozhou236800,China;

3.ZhejiangAFUniversity,Hangzhou310000,China;4.BozhouVocationalandTechnicalCollege,Bozhou236800,China;

5.WuhuInstitutesforFoodandDrugControl,Wuhu241000,China)

ABSTRACT:OBJECTIVEToidentifyLeonurusjaponicusandLagopsissupinabyDNAbarcodingandspecificprimers.METHODSTheNJphylogenetictreewasconstructedbyamplificationandsequencingofL.japonicusandL.supinabasedonITS2universalprimes.SpecificprimersofL.japonicusandL.supinaweredesignedaccordingtoITS2sequence,andtheirspecificity,annealingtemperature,amounto