第48讲基因工程.pptxVIP

第49讲基因工程

考点一重组DNA技术的工具

考点一重组DNA技术的工具一、基因工程的概念按照人们的愿望，进行严格的设计并通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术基因工程操作对象原理优点基本过程基因克服远缘杂交不亲和障碍；定向改造生物性状基因重组剪切→拼接→导入→表达

考点一重组DNA技术的工具二、基因工程的工具限制性内切核酸酶(简称限制酶)——“分子手术刀”1主要来自原核生物识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开专一性来源：特性结果：产生黏性末端或平末端一般由6个核苷酸组成，是一段回文序列(即一条链正向读与它的互补链反向读碱基顺序一样)黏性末端平末端注意：将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，会产生四个末端

考点一重组DNA技术的工具DNA连接酶——“分子缝合针”2作用：类型将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键分子缝合针E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源：特点：只能连接互补黏性末端大肠杆菌来源：特点：T4噬菌体互补黏性末端和平末端都能连接(但后者效率较低)

考点一重组DNA技术的工具与DNA有关的几种酶的比较名称作用部位作用结果限制酶DNA连接酶DNA聚合酶DNA水解酶解旋酶磷酸二酯键碱基对中的氢键将DNA切成两个或多个片段磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子磷酸二酯键以DNA单链为模板，将单个脱氧核苷酸依次连接到DNA片段的3’端磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸将双链DNA分子局部解旋为单链

1.根据所学知识，完成以下填空：①限制酶②解旋酶③DNA连接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶baA.能断裂a处的酶为_______

B.能连接a处的酶为_______C.能断裂b处的酶为_______①考点训练磷酸二酯键氢键③④②

考点一重组DNA技术的工具基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”3作用：种类特点：将外源基因送入受体细胞，使之能得到复制和进行表达最常用：质粒其他：噬菌体、动植物病毒一种裸露的、结构简单、独立于细胞核或拟核外的并具有自我复制能力的环状双链DNA分子天然质粒需进行人工改造才能用于基因工程终止子：位于目的基因下游，是使转录终止的一段有特殊序列结构的DNA片段启动子：是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，是RNA聚合酶识别和结合的部位，具有驱动基因转录的作用复制原点：复制的起始位点，此处碱基A和T较多标记基因：用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将其筛选出来

考点一重组DNA技术的工具三、基因工程操作中限制酶的选择方法1.根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类①不破坏目的基因原则：应选择切点位于目的基因两端的限制酶，不能选切点位于目的基因内部的限制酶②确保出现相同黏性末端原则：即切割目的基因和质粒的限制酶要相同，同时为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，确保目的基因和质粒正确连接，通常使用两种限制酶分别切割目的基因和质粒(即双酶切)如图选择PstⅠ和EcoRⅠ这两种酶

考点一重组DNA技术的工具启动子方向目的基因转录方向限制酶切割abcdDNA连接酶a、b、c、d四个黏性末端相同单酶切：正向连接反向连接双酶切：限制酶a切割abDNA连接酶限制酶b切割限制酶a切割限制酶b切割aba和b黏性末端不同

考点一重组DNA技术的工具2.根据质粒的特点确定限制酶的种类①保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：即所选限制酶不要破坏这些结构当出现多个标记基因时可以选择破坏其中一个②切割位点必需位于启动子和终止子之间

考点二基因工程的基本操作程序

在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因，主要是指编码蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子考点二基因工程的基本操作程序一、目的基因的筛选与获取——前提目的基因：【小提示】基因按功能可分为结构基因(能转录并翻译)、转录基因(只转录)和调控基因(调控其他基因表达)筛选目的基因的方法①从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选②利用序列数据库和序列比对工具进行筛选

③利用PCR获取和扩增目的基因②从已构建的基因文库中获取考点二基因工程的基本操作程序获取方法①人工合成逆转录法主要用于相对分子质量较大而又不知其核苷酸序列的基因，它以目的基因的mRNA为模板，借助逆转录酶合成双链DNA，其过程如下：化学合成法依据某一蛋白质的氨基酸序列，推测出其基因序列，然后直接合成目的基