融合荧光蛋白的纤维素酶表达与性质分析.pdfVIP

第２１卷第２期生物加工过程Ｖｏｌ２１Ｎｏ２

２０２３年３月ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＭａｒ．２０２３

－

ｄｏｉ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１６７２３６７８２０２３０２００７

融合荧光蛋白的纤维素酶表达与性质分析

周姗娜，胡艳梅，乔琦茗，李华南，江正兵

（湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室，湖北武汉４３００６２）

摘要：纤维素酶是能特异性分解纤维素的一系列酶，被广泛应用于食品加工处理、衣物洗涤、农业及造纸等行业。

纤维素酶通过不同的水解方式协同作用将纤维素水解为寡糖或可发酵糖。在将纤维素分解成寡糖的过程中，外切

葡聚糖酶（ＣＢＨ）和内切葡聚糖酶（ＥＧ）发挥了重要作用。目前关于两种酶协同作用机制和顺序尚未有明确的解

释。本研究将嗜热毛壳菌来源的ｃｂｈ和葡萄穗霉来源的ｅｇ分别与绿色荧光蛋白基因ｇｆｐ和红色荧光蛋白基因

ｍｃｈｅｒｒｙ进行融合，并电转入毕赤酵母Ｘ３３进行异源表达，随后对这两种融合纤维素酶ＣＢＨＧＦＰ和ＥＧ

ＭＣＨＥＲＲＹ进行了性质分析。结果表明：两种融合荧光蛋白的纤维素酶基因在毕赤酵母Ｘ３３中实现了分泌表达。

纯化的ＣＢＨＧＦＰ和ＥＧＭＣＨＥＲＲＹ的蛋白浓度与荧光强度呈正相关关系。对羧甲基纤维素钠（ＣＭＣＮａ）、磷酸

膨胀纤维素（ＰＡＳＣ）、滤纸（ＦＰ）、微晶纤维素（Ａｖｉｃｅｌ）的活性测试结果显示，ＣＢＨＧＦＰ对ＣＭＣＮａ、ＰＡＳＣ、Ａｖｉｃｅｌ均

有催化活性，而ＥＧＭＣＨＥＲＲＹ对ＣＭＣＮａ、ＰＡＳＣ具有催化活性，ＣＢＨＧＦＰ对ＰＡＳＣ有最高比酶活（１１Ｕ／

ｍｇ）；ＥＧＭＣＨＥＲＲＹ对ＣＭＣＮａ有最高比酶活（１９Ｕ／ｍｇ），对比原始纤维素酶ＣＢＨ和ＥＧ对不同底物的活性，

融合荧光蛋白的纤维素酶能保持８５％以上的酶活。ＣＢＨＧＦＰ和ＥＧＭＣＨＥＲＲＹ最适反应温度分别为５５和５０

℃，最适反应ｐＨ分别为６和５，与原始纤维素酶的相应性质一致。ＥＧＭＣＨＥＲＲＹ和ＣＢＨＧＦＰ蛋白浓度与其荧

光强度呈线性正相关且性质相近，同时在ｐＨ为６、温度为５０℃的情况下均能保持８０％以上的酶活，因此可用于后

续的纤维素酶协同反应机制的研究。

关键词：纤维素酶；绿色荧光蛋白外切葡聚糖酶；红色荧光蛋白内切葡聚糖酶；荧光蛋白；毕赤酵母；协同催化

－－－

中图分类号：Ｑ５５６文章编号：１６７２３６７８（２０２３）０２０１８４０７

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｓｅｓｆｕｓｉｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ

ＺＨＯＵＳｈａｎｎａ，ＨＵＹａｎｍｅｉ，ＱＩＡＯＱｉｍｉｎｇ，ＬＩＨｕａｎａｎ，ＪＩＡＮＧＺｈｅｎｇｂｉｎｇ

（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓａｎｄＥｎｚｙｍｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓｉｓａｒｅｓｅｒｉｅｓｏｆｅｎｚｙｍｅｓｔｈａｔｃａｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｄｅｃｏｍｐｏｓｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，ａｎｄｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎ

ｖａｒｉｏｕｓｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓｓｕｃｈａｓｆｏｏｄｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ｌａｕｎｄｒｙ，ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ｐａｐｅｒｍａｋｉｎｇ．Ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓｃａｎｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ

ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅｉｎｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｏｒｆｅｒｍｅｎｔａｂｌｅｓｕｇａｒｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｗａｙｓ．Ｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｂｒｅａｋｉｎｇ

ｄｏｗｎ