铂基三维电化学传感器构建及细胞活性氧释放实时监测.pdfVIP

摘要

细胞是生命活动的基本结构和功能单元，承载了遗传信息的传递、代谢反应的

进行、信号的传导以及能量的转换等多种重要功能。活性氧（Reactiveoxygenspecies，

ROS）是细胞生理活动中产生的一类氧衍生物，具有浓度低、寿命短和反应活性高

等特点，在细胞信号传导、免疫反应和细胞凋亡等生理过程中发挥着重要的作用，

ROS水平高低与多种疾病的发生和发展密切相关。因此，在细胞层面研究ROS的

动态变化过程，对于理解ROS在生理和病理过程中的作用机制具有重要意义。

电化学方法具有响应速度快、灵敏度高、可原位检测和仪器简单等优点，在细

胞ROS释放的监测方面得到了较为广泛应用。其中，以具有优良电催化性能的铂纳

米材料为传感材料制备的电化学传感器，实现了对细胞、亚细胞水平ROS释放的实

时监测。但在这些监测过程中，细胞大多培养在培养瓶等平面基底上，即采用二维

（Two-dimensional，2D）细胞培养模型，与细胞在体内所处的真实三维（Three-

dimensional，3D）微环境及其在组织的实际状态存在差异，这可能导致一定程度上

无法准确再现细胞在体内的真实状态。为了在接近体内的3D培养状态下实时监测

细胞ROS的释放，本论文围绕铂基三维电化学传感器构建及细胞活性氧释放实时

监测展开，具体研究内容如下：

1.提出了铂纳米颗粒（PtNPs）修饰泡沫镍（NF）的多级孔结构3D电化学传

感器用于细胞ROS释放检测的新方法。首先，在具有微米级孔结构的NF骨架表面

刻蚀出大量纳米孔，从而形成了多级孔结构。随后，采用化学还原法在多级结构NF

上沉积具有高催化活性的PtNPs，制备了多级孔结构3D电化学传感器。该传感器

中NF的微孔结构有利于细胞培养过程中营养物质和代谢产物的高效运输，可保证

细胞的良好活性及增殖能力；纳米孔增大了NF基底的比表面积，为PtNPs的负载

提供更多的位点，可显著提升传感器的催化性能。对ROS模型分子HO的研究结

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果证明，该3D电化学传感器对ROS的检测具有响应迅速、灵敏度高等优势，线性

范围为200nmol/L~20μmol/L，灵敏度达423.1nA/(μmol/L)，检出限低至

1.2×10-7mol/L（S/N3）。此外，该3D传感器实现了细胞在其表面的长时间（3天）

培养与ROS释放的实时监测。

2.构建了3D细胞培养与电化学传感集成平台。通过引入胶原水凝胶作为细胞

3D培养基质，并结合具有优良电化学性能和抗污染性能的PEDOT@Pt@PEDOT夹

心型电化学传感器，实现了对3D培养状态下细胞ROS释放的实时监测。在该平台

中，胶原3D水凝胶实现了对HeLa和A549细胞的3D培养，细胞呈现明显的增殖

现象且细胞活性高。以PtNPs和PEDOT为基础的夹心型电化学传感器，对ROS

（以HO为模型分子）展现出良好的电化学性能。在100nmol/L~100μmol/L的

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线性范围内，灵敏度为176.0nA/(μmol/L)，检出限低至4.3×10mol/L（S/N3）；

在3D培养环境中表现出良好的抗污染性能。培养基和胶原污染4小时后，对铁氰

化钾的电催化性能仍维持在原始性能的60%以上。基于以上优良的3D细胞培养和

电化学性能，采用该集成平台研究了3D培养状态下HeLa和A549细胞在不同刺激

剂作用下的ROS释放行为。研究结果表明，2D与3D培养状态下的细胞ROS的释

放过程呈现出明显差异，3D培养条件的安培曲线中出现了多个响应电流。

3.在以上工作的基础上，本章进一步构建了PtNPs和PEDOT功能化的3D聚

二甲基硅氧烷（PDMS）电化学传感器。该传感器首先以NF为可牺牲模版，制备了

具有3D微米孔结构的PDMS骨架；其次，修饰PEDOT制备了