苜蓿中阿维菌素残留量的测定高效液相色谱法-内蒙古自治区标准.pdfVIP

苜蓿中阿维菌素残留量的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了苜蓿中阿维菌素残留量的高效液相色谱的测定方法。

本文件适用于苜蓿中阿维菌素残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中阿维菌素残留物经过乙腈提取，提取液经过滤浓缩后，用SPE氨基柱净化，洗脱液经浓缩后，

用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

乙腈（CHCN）：色谱纯。

3

二氯甲烷（CHCl）。

22

甲醇（CHOH）：色谱纯。

3

氯化钠（NaCl）。

甲醇+水溶液（9+1，v/v）：量取9.0mL甲醇，加入水1.0mL，混匀。

甲醇+二氯甲烷溶液（5+95，v/v）：量取5.0mL甲醇，加入二氯甲烷95.0mL，混匀。

阿维菌素标准品：阿维菌素（CHO）纯度不小于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标

487214

准物质。

阿维菌素标准储备液（1.0mg/mL）；准确称取适量的阿维菌素标准物质，用甲醇溶解并配制成

（1.0mg/mL）的标准储备液，保存于-18℃冰箱内，有效期6个月。

阿维菌素标准使用液(10.0μg/mL)：准确吸取0.10mL阿维菌素的标准储备液至10.0mL棕色

容量瓶内，用甲醇稀释定容至刻度，配制成10.0μg/mL的标准使用溶液，于-18℃冰箱内避光保存，

有效期1个月。

1

阿维菌素标准系列工作液：分别吸取浓度为10.0μg/mL阿维菌素标准液0.05mL、0.10mL、

0.15mL、0.20mL、0.25mL于10mL容量瓶，用甲醇+水（5.5）定容至刻度，该标准系列阿维菌素浓

度分别为0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.15μg/mL、0.20μg/mL、0.25μg/mL，现用现配。

固相萃取柱：NH，500mg/6mL（使用前活化）。

2

微孔过滤膜：0.45µm有机相。

水为GB/T6682规定的一级水。

6仪器和设备

高效液相色谱仪：配有紫外检测器（或二极管阵列检测器）。

分析天平：感量0.01mg和0.01g。

高速匀浆机：转速≥10000r/min。

涡旋混合器。

氮吹仪。

粉碎机。

样品筛：筛孔尺寸1.0mm。

水浴锅（可控温）。

7试样制备

按照GB/T14699.1中有关规定采集样品，去杂质后充分混匀，按照GB/T20195有关规定制备试样，

利用四分法取样后，充分研磨，过1.0mm筛，为草粉样，新鲜样品利用四分法取样后，充分破碎作为新

鲜分析样品备用。将处理好的试样放置-18℃冰箱保存。

8测定步骤

提取

称取新鲜试样25g（精确至0.01g）或草粉试样2g（精确至0.01g）于100mL的玻璃烧杯中，加

入50.0mL的乙腈（5.1），在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g～7g氯化钠

（5.4）的100mL具塞量筒中，收集滤液40mL～50mL，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30

min，使乙腈相和水相分层。

净化

从具塞量筒中吸取10.0mL乙腈溶液，放入150mL烧杯中，将烧杯放在70℃水浴上加热，杯内缓缓

通入氮气，蒸发至近干，加入2mL的甲醇+二氯甲烷（5.6）溶解残渣，待净化。将氨基柱（5.11）用4

mL甲