可见分光光度法和紫外分光光度法课件.pptVIP

（三）比吸光係數比較法比吸光係數比較法是利用標準的值進行定量測定的。方法：將樣品的比吸光係數與標準物質的比吸光係數比較，計算出樣品的含量。可見分光光度法可見分光光度法和紫外分光光度法分光光度法（visiblespectrophotometry)可見分光光度法和紫外分光光度法根據物質的吸收光譜及光的吸收定律，對物質進行定性和定量分析的分析方法可見光紫外紫藍青綠黃橙紅外400450480500560600650760800nm紅可見分光光度法：380nm～780nm紫外分光光度法：200nm～380nm紅外分光光度法：780nm～300000nm第一節物質的吸收光譜一、物質對光譜的選擇性吸收可見分光光度法和紫外分光光度法光照射某物質，物質能夠吸收光，使原有的基態轉為激發態，只有當分子的能量(h?)與被照射物質粒子的基態和激發態能量之差(?E)相等時才能被吸收。M(基態)+h???M*(激發態)可見分光光度法和紫外分光光度法▲單色光：具有同一波長的光▲複合光：由不同波長光組成的光白光（日光、白熾燈光等）：由不同顏色的光按一定強度比例混合而成■光的性質和物質的顏色光由光量子組成，其能量與λ波長成反比E=hr=hcλ紅橙黃綠青青藍藍紫◆對角上的顏色稱為互補色◆物質的顏色與吸收光顏色為互補色■物質顏色與吸收光顏色的關係可見分光光度法和紫外分光光度法物質對光的吸收具有選擇性，若溶液選擇性地吸收了某種顏色的光，則溶液呈吸收光的互補光。可見分光光度法和紫外分光光度法▲溶液呈吸收光的互補色光的顏色透過光的顏色第一節物質的吸收光譜一、物質對光譜的選擇性吸收二、物質的吸收光譜例如：KMnO4呈紅色，吸收了綠色的光可見分光光度法和紫外分光光度法吸收光譜(A-λ曲線)(absorptionspectrum)圖13-2不同波長KMnO4溶液吸收光譜▲當濃度改變時λmax位置不變峰的高度A成比例增加0.20.40.60.8ⅠⅡⅢ400450500550600650Ⅰ20mg／LⅡ40mg／LⅢ60mg／LnmAλλmax=520nm溶液濃度c成比例增加A：稱吸光度λ相同時：可見分光光度法和紫外分光光度法第一節物質的吸收光譜一、物質對光譜的選擇性吸收二、物質的吸收光譜選擇λmax的單色光，目的是使測定峰高值最大(靈敏度最大），減小測量誤差。第三節可見分光光度計主要部件1.光源：鎢絲燈（λ360~2500nm）穩定，足夠光強度2.單色器：獲取單色光（濾光片；棱鏡或光柵）3.吸收池(樣品池或比色皿):石英,玻璃4、檢測器：光電池、光電管5、指示器：指針式微安表可見分光光度法和紫外分光光度法第三節可見分光光度計可見分光光度法和紫外分光光度法圖721分光光度計光學系統示意圖光源聚光鏡反射鏡吸收池光電管狹縫准直鏡棱鏡可見分光光度法和紫外分光光度法圖混合光在棱鏡中的色散600600600白光→棱鏡（或光柵）連續光譜轉動棱鏡或光柵狹縫處獲單色光（λ）檢測器(detector)將光強度信號可測電信號光電池：在一定條件下，光電流與照射光強度成正比硒光電池結構示意圖入射光+鐵片半導體硒片金屬薄膜e可見分光光度法和紫外分光光度法5、指示器吸光度與百分透光度標度2.01.00.70.60.50.40.30.20.150.10.050102030405060708090100AT(%)721型分光光度計採用指針式的微安表可見分光光度法和紫外分光光度法現分光光度計採用數字顯示，直接讀取A值。但先用參比溶液(空白溶液)調節T值為100%值。一、透光率和吸光度光的吸收示意圖dxb入射光強度:I0吸收光強度:Ia透過光強度:It反射光強度:Ir第二節分光光度法的基本原理實際測量中常用參比消除反射光的影響，即有：I0=Ia+ItI0=Ia+It+Irdxb透光率的負對數稱為吸光度，用符號A表示。A愈大，溶液對光的吸收愈